HR8591-x 细胞脂质染色试剂盒

L21是一种亲脂性染料，具有对环境敏感的荧光。在富含脂质的环境中发出强烈的荧光，而在水性介质中的荧光却很少。它是用于通过荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内脂质滴的极佳的重要染色剂。L21使细胞内脂质滴染成红色。当观察细胞的黄橙色荧光（450-500 nm激发；> 528 nm发射）而不是红色荧光（515-560 nm激发；> 590 nm发射...

产品简介：

细胞脂质染色试剂盒是利用L21荧光探针进行细胞内脂质染色的试剂盒。本试剂盒中的L21探针为红色荧光标记的细胞脂质探针，具有553/636nm的最大激发/发射波长。

L21是一种亲脂性染料，具有对环境敏感的荧光。在富含脂质的环境中发出强烈的荧光，而在水性介质中的荧光却很少。它是用于通过荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内脂质滴的极佳的重要染色剂。L21使细胞内脂质滴染成红色。当观察细胞的黄橙色荧光（450-500 nm激发；> 528 nm发射）而不是红色荧光（515-560 nm激发；> 590 nm发射）时，可以获得更好的细胞质脂质滴选择性。

L21是非常卓越的活体染料，它对细胞质中的脂质体具有更好的选择性，在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞脂质结合后其荧光强度大大增强。它进入细胞膜后，在整个细胞扩散，最佳浓度时可以使整个细胞染色，将细胞内脂质体染成红色。L21被激发后可以发出红色的荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命。通过荧光显微镜和流式细胞术来检测细胞内脂质。

L21通常不会明显影响细胞的活力，因此被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂（long-term tracer）。除了最简单的细胞脂质荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：

● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● 移液器 ● 离心机 ● PBS/HBSS（无酚红）

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● L21染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

● 染色后立即进行分析。

● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将L21荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针L21进行500-2500倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可不用本试剂盒中的试剂B，直接用HBSS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释L21染料至所需浓度。

● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度为试剂盒中探针母液的5000-25000倍稀释，5000倍适合大多数细胞样本。

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。

2、细胞染色

悬浮细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2次。

【注】：

● 500×g离心5分钟。

2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10⁶/mL。

3) 在37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用5 分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 孵育结束，500×g离心5 分钟。

5) 倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。

6) 重复（4），（5）步骤两次以上

贴壁细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2次。

2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。

【注】：

● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。

3) 37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用5分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 吸干染色工作液，用培养液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10分钟，然后吸干培养基。

3、用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测

激发波长为553nm，最大发射波长为636nm。

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