HR8841 羟基自由基(·OH)检测试剂盒(O26,绿色荧光)

在激发波长488nm，发射波长525 nm附近，使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光，从而测定细胞内羟基自由基（•OH）水平。...

产品特点：

● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；

● 背景低，灵敏度高；

● 线性范围宽，使用方便。

检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，激发波长488 nm，发射波长525 nm。或者按照FITC荧光检测条件检测。 ● 离心机

● PBS缓冲液 ● HBSS（无酚红）

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

● 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。

● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

● O26探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。

● 对不同的细胞，应选择合适的孵育时间，以观察羟自由基的变化。

● 由于染色工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。

● 探针对湿度非常敏感，若是探针溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。

● 试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

使用方法：

O26探针标记：

1. O26溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，1000倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入O26探针溶液至所需浓度。

【注】:

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500-2000倍稀释，1000倍适合大多数细胞样本。

● 不能用含有血清的培养基稀释探针。

● 工作液现配现用。

2. 依据细胞羟自由基含量的不同，孵育时间可选择15-60分钟，在37℃或室温进行避光孵育。

3. 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞。

4. 用相关仪器进行荧光检测。

【注】：
● 荧光强，羟自由基强度高。

荧光显微镜检测：

1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下染色观察；

2. 对悬浮生长细胞，染色后取25-50μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。

3. 荧光显微镜检测。

流式细胞仪分析：

1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5～1 ml冰冷PBS重悬细胞（5～10万）。

2. 采用488nm波长激发，测定525 nm的发射，羟自由基强度高的细胞有较强的绿色荧光。

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