HR8262-200T 细胞耗氧率检测试剂盒
R01与O2的这种反应是非破坏性且完全可逆的,R01无细胞毒性,是化学稳定的,惰性的,水溶性的和细胞不渗透的,不能透过完整的细胞膜。因此还可同时与糖酵解,线粒体膜电位JC-1,ROS和细胞ATP、LDH等检测的试剂结合使用,进行多参数检测。用R01进行细胞外耗氧检测方法及其简单,不需要适用特殊的仪器设备,只需要荧光酶标仪之类的荧光读...
产品特点:
● 广泛适用于各种体外模型;不再局限于单层细胞,还能测定悬浮细胞、微生物和特定的3D培养物;
● 简单的“混合-检测”方案允许使用多种其他分析试剂盒进行多参数分析;
● 可逆转,能够观察耗氧量的瞬态和长时间变化;
● 可适配多种荧光酶标仪以及标准96孔和384孔;
● 以高通量的形式方便地测量;
● 无需等待专用设备空闲所需的实验室时间,也无需大额资金专用设备投入。
产品用途:
● 线粒体功能和细胞代谢研究;
● 测量活细胞中的线粒体活性;
● 研究各种处理对细胞耗氧量的影响;
● 研究基因修饰对细胞耗氧量的影响;
● 研究呼吸和线粒体功能;
● 探究氧含量与细胞代谢变化之间的联系;
● 直接评估药物处理的线粒体毒性。
适用样本类型:
● 细胞:贴壁细胞/悬浮细胞/透化细胞;
● 分离的线粒体;
● 3D培养物;组织;
● 分离的酶;
● 微生物:细菌/酵母/霉菌。
荧光检测模式:
● 基础模式:荧光强度测定;
● 标准模式:时间分辨荧光测量(TR-F);
● 高级模式:荧光Lifetime calculation(FLIM,Autofluorescence Lifetime Imaging system,Dual-read Ratiometric TR-F measurement)
【注】:
● 以上取决于酶标仪的类型和仪器设置,不是所有仪器可用。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
● 荧光酶标仪(须配备相应的波长过滤器和温度控制器。时间分辨荧光功能的读板机佳(如果有)) ● 离心机 ● PBS/HBSS(无酚红) ● 对照试剂(选配,非必须):Glucose Oxidase,Antimycin A,FCCP ● 黑色透明底荧光专用培养板
使用注意事项:
● 螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 以下操作以96孔细胞培养板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。O2荧光探针终浓度25倍稀释最佳。
● R01探针的信号变化直接取决于所测量细胞类型的细胞呼吸速率,建议尽可能使用每孔高的细胞密度作为起点,并根据需要减少细胞数量。
● 并非所有细胞类型都消耗足够用于检测的氧气。
● 必须用荧光培养专用的透明底黑色培养板,减少检测时各孔之间的光互相干扰。
● 用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需37℃预热。
● 添加氧气封闭液时注意避免产生气泡。
● 尽可能使用多通道移液器添加试剂。
● 如果药物有红色荧光(如阿霉素等)需要换液,不含培养基和待测药物,用HBSS货PBS体系检测,在无血清无酚红环境检测。
● 建议设定FCCP处理的阳性对照样本。
关于仪器设置:
● 温度对检测有较大影响。有条件的话,务必使用配有温度控制的酶标仪。
● 常规的荧光信号强度测量,使用基于单色仪或基于过滤器的酶标仪,最佳激发波长使用450-460nm,发射波长使用586-600nm。可根据实际机器和样本选择信号最强的波长。
● 具有检测增益参数(PMT,Parameters)的通常设置为中或高。
● 使用bottom read读数和top read读数均可,基于不同的细胞模型,建议在预实验时两种读数模式均尝试下,看哪种的趋势更加明显。
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