HR8208-50T 外泌体提取试剂盒(乳汁/唾液)

总外泌体提取试剂盒（乳汁/唾液用）适用于从各种乳汁/唾液样品中提取总外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。...

产品特点：

● 使用方便，无需超速离心，省时省力；

● 纯度高，富集量大，应用范围广；

● 获取的Exosome 结构和功能完整；

● 稳定性好，便于运输，便于保存。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 移液器

使用注意事项：

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。

● 以下以2mL乳汁/唾液为例，实际操作时按乳汁/唾液样本和提取液用量体积比等比例调整使用即可。

● 不同乳汁/唾液样本外泌体数量差异极大，请根据实际情况选择乳汁/唾液样本的量，根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的乳汁/唾液样本。

● 常规的乳汁/唾液样本最佳上样量为5-10mL及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的乳汁/唾液样本。

● 已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4℃保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。

使用方法：

1、收集2mL待提取的乳汁/唾液样品，置2-8℃保存。

【注】：

● 冻存样品解冻后置2-8℃保存。

2、将样品在4℃条件下，3000×g离心15分钟。弃沉淀，收集上清。

3、小心将上清移入另一干净离心管中。

4、将样品在4℃条件下，10000×g离心20分钟。弃沉淀，收集上清。

5、小心将上清移入另一干净离心管中。

6、在2mL乳汁/唾液样品中加入2mL提取液A，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。

7、在4mL液体样品中加入1mL提取液B，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。

【注】：

● 试剂B使用前请充分混匀。

8、置2-8℃冰箱静置过夜。

【注】：

● 静置保存时间不少于10小时。

9、在4℃条件下，10000×g离心60分钟。

10、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干上清。

● 吸取时小心，防止吸掉沉淀。

11、取50-100μL外泌体保存液将沉淀重悬，即得到外泌体样品。

【注】：

● 可以不用试剂盒中的外泌体保存液试剂C，根据下游实验需要用自己的其它缓冲液重悬保存外泌体。

● 也可直接用于蛋白提取。

12、将外泌体样本-80℃保存或直接用于下游应用。

【注】：

● 外泌体短期保存置于2-8℃保存即可，一周以上长期不用时置-80℃保存。

● 保存前可以用0.22μm过滤除菌。

常见问题分析：

● 如何鉴定提取的外泌体？

通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。

● 外泌体WB标志蛋白用什么？

在进行WB检测时，通常检测外泌体标志蛋白为CD63、CD9、CD81、TSG101、ALIX、HSP70 等。

● 进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择？

没有，该检测属于定性检测。

● 蛋白浓度低？

很多细胞外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。

处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

● 抽提得到的RNA 浓度低？

很多细胞外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。

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