HR0119-50 高脂肪样本蛋白提取试剂盒

高脂肪样本蛋白提取试剂盒适用于从各种脂肪含量高的细胞和实体组织，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。...

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 移液器 ● 离心机 ● 涡旋混匀器 ● 振荡器 ● PBS

注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、TubμLin。

使用方法：

细胞蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL冷的蛋白提取液中加入2μL 蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

● 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。

2、取5-10×10⁶个细胞，在4℃，2000×g条件离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3、用冷 PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4、每 5×10⁶个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。

【注】：

● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

5、套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。

● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。

● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

6、将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

7、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织蛋白提取：

1、提取液制备：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2、取100mg-200mg组织样本剪碎，加入500μL蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机充分匀浆。

【注】：

● 如果组织样品很细小，可剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。

● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。

3、将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-30分钟。

【注】：

● 用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。

● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

4、套上液体收集管，将提取液吸入蛋白离心管中，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

【注】：

● 蛋白离心管适用于过滤除去不溶性大颗粒组织固体杂质，固态脂肪等，如果是做脂肪含量低的细胞或无明显固体不溶物时，可以不使用离心柱，直接将匀浆液离心即可。

● 提取液液面有脂滴时，可以用移液器小心吸除脂滴即可。

● 蛋白液里的微量脂肪需要直接过滤除去，可以使用我们的蛋白去脂肪柱。

● 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心柱，一定要先套上收集管再吸入蛋白液。

5、将液体收集管中的液体吸入另一预冷的干净离心管，在4℃，10000×g条件下离心5分钟。

6、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。

7、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

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