HR0257-50T 酵母线粒体提取试剂盒

线粒体是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的。本产品提供全套试剂,适用于从各种酵母样品中提取线粒体。提取过程简单方便。...

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● PBS缓冲液

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

使用方法：

1、酵母培养物,在4℃,1000×g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集酵母沉淀。

2、用PBS洗涤酵母两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

● 在1000×g离心5分钟。

3、每100μL体积或100mg湿重酵母沉淀物中加入400μL酵母线粒体提取液A,混匀后,在30℃条件下保温15 分钟。

【注】：

● 酵母数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。

4、在1000×g条件下离心5-10分钟,收集酵母沉淀。

5、用300μL酵母洗涤液D洗涤酵母一次,离心收集酵母。

6、酵母沉淀物中加入500μL酵母线粒体提取液B,充分混匀。

【注】：

● 根据酵母细胞量调整提取液用量,一般加菌体体积的2-5倍均可。

● 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入250-500μL提取液。

7、在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。

● 如果没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔10分钟用移液器吹打混匀。

● 不用酵母样本需要的时间差异较大,根据下游细胞裂解的难易程度调整,如果下游试剂C处理后沉淀没有明显减少,需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。

8、在2000×g条件下离心5-10分钟,弃上清,收集沉淀。

9、沉淀用300μL酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。

10、在沉淀中加入400μL酵母线粒体提取液C,充分混匀,然后在振荡器上振荡10-30分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速,保持提取液能轻微晃动即可。

● 如果没有振荡器的话,在4℃静置,稍微延长处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

● 试剂C处理后沉淀应减少,否则延长处理时间。

11、在4℃,500×g条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。

12、将上清吸入另一干净离心管。

13、在4℃,12000×g以上条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。

14、在沉淀中加入400μL线粒体保存液E,混匀。

15、在4℃,12000×g条件下离心20分钟,弃上清,收集沉淀。即得到酵母线粒体样品。

16、根据下游实验需要,将沉淀用相应的缓冲液重悬。置冰箱备用或直接用于下游实验。

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