HR9098-50T 核糖体蛋白提取试剂盒

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，需除盐后再用于2D电泳。如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。...

使用方法：

细胞核糖体提取：

1、取1-2×10⁷个细胞，在4℃，500-1000×g条件离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2、用冷PBS 洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

【注】：

● 在500×g-1000×g条件下离心5分钟。

3、加入500μL-1mL冷的试剂A，置冰上10分钟。

4、用Dounce匀浆器匀浆20-30下。

【注】：

● 标准Dounce匀浆器用紧杵5-8次，松杵匀浆15-20次。

● 匀浆杵一个上下来回为一次。

● 普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。

5、将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。

6、将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7、将上清在4℃，100000×g-120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

● 如果条件允许，可将离心时间延长到2-24小时。可以提高核糖体回收率。

● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。

8、在沉淀中加入400μL冷的试剂B，混匀。

9、在4℃，100000×g-120000×g力条件下离心60分钟。

【注】：

● 如果条件允许，可将离心时间延长到2-24小时。可以提高核糖体回收率。

● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。

10、弃上清，沉淀用50-100μL核糖体提取液C重悬。

11、即得到核糖体蛋白样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织核糖体提取：

1、取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

2、用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

【注】：

● 在500×g-1000×g条件下离心5 分钟。

3、加入500μL-1mL冷的试剂A，置冰上10分钟。

4、用Dounce匀浆器充分匀浆20-30下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。

【注】：

● 标准Dounce匀浆器用紧杵5-8次，松杵匀浆15-20次。

● 匀浆杵一个上下来回为一次。

● 普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6、在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。

7、将上清在4℃，100000×g-120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。

【注】：

● 如果条件允许，可将离心时间延长到2-24 小时。可以提高核糖体回收率。

● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS 补充液体量后用合适的离心管离心。

8、在沉淀中加入400μL冷的试剂B，混匀。

9、在4℃，100000×g-120000×g力条件下离心60分钟。

【注】：

● 如果条件允许，可将离心时间延长到2-24小时。可以提高核糖体回收率。

● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。

10、弃上清，沉淀用50-100μL核糖体提取液C重悬。

11、即得到核糖体样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

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