HR7814-200T 冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒
在激发波长500nm,发射波长525 nm 附近,使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光,从而测定组织内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。...
产品特点:
● 使用方便:可用荧光显微镜直接观察;
● 背景低,灵敏度高;
● 线性范围宽,使用方便。
检测方法:
● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦显微镜
样本类型:
● 新鲜冰冻切片 ● 振动切片
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS
使用注意事项:
● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
● 对于某些样本,如果荧光太强,可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
● 以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。
使用方法:
一、试剂配制
1、根据样本数,用纯水将DCFHDA活性氧荧光探针200-1000倍稀释,配成染色工作液。
【注】:
● 不同样本的活性氧差异较大,需要根据预实验结果调整稀释倍数。一般染色终浓度按试剂盒中探针母液的200-1000倍稀释,最大可至10000倍稀释,1000倍稀释适合大多数样本。
2、用纯水将10×清洗液10倍稀释,配成1×清洗液工作液。
二、探针标记
1、准备待测的厚为10-20μm的未经固定处理的冰冻切片。
【注】:
● 必须使用新鲜组织(手术切除后1小时内)制成的冰冻切片/振动切片。
● 否则不新鲜的样本可能ROS已经流失,检测不到活性氧。
● 非新鲜样本残余的ROS也可以检测到。
2、室温下,小心加上200μL清洗液工作液,铺满整个切片表面,静置5-10分钟。
3、小心吸除清洗液。
4、滴加100μL染色工作液,在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
【注】:
● 最好在湿盒中孵育,避免液体蒸发。
5、移除染色液。
6、用PBS洗涤切片2-3次。
7、加盖玻片或甘油封片。
8、荧光显微镜检测。
【注】:
● 染色完成后,立即进行荧光定性分析。
● 激发波长488nm,发射波长525nm。
● 荧光强,表明活性氧(ROS)含量高。
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