HR0451-100T Hoechst33342/PI双染试剂盒

Hoechst33342/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA 探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。Hoechst33342染色液A可以透过正常细胞膜，而细胞凋亡后，细胞膜对Hoechst33342染色液A的通透性增加，PI 染色液B不能透过细胞膜，对正常细胞和凋亡细胞不能染色，而对坏死细胞可以染色。...

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 流式细胞仪或荧光显微镜 ● PBS ● 纯水 ● 移液器 ● 离心机

注意事项：

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

使用方法：

1、染色缓冲液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL试剂C加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。

2、收集样本细胞，细胞数量在10×10⁵个以内。

3、用PBS洗涤细胞两次。

4、用500μL-1mL染色缓冲液将细胞重悬。

5、加入5-10μL Hoechst33342染色液A。

6、加入5-10μL PI染色液B。

7、轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。

8、用 PBS 洗涤细胞。

9、用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。Hoechst 33342用紫外光激发，PI用蓝光激发。

Hoechst33342-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，PI-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。

结果分析：

正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。

形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。

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