HR0351-1 抗体去除液(Western)
本产品可以对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下,将用过的膜浸泡在抗体去除液中30-60分钟,可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后,可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验,因而可利用同一张膜进行多次蛋白检测。适宜从少量样品多次检测多种不同蛋白质。采用这方法多次检测同一张膜上...
用途:
清除硝酸纤维素膜或PVDF 膜上结合的抗体,不影响抗原蛋白。
使用方法:
1、将膜充分浸泡于适当体积的抗体去除液中,室温孵育15-30分钟并不时晃动。孵育时间的长短应根据实验条件进行优化。洗脱某些抗体需要较长的时间如30-60分钟。
2、用镊子取出膜,用自备Western洗涤缓冲液快速淋洗膜一次,然后用TBST洗膜3次,每次10分钟。
3、此时膜上抗体已去除膜已经再生。用脱脂奶粉或BSA封闭一小时,进行下一轮Western Blot实验。
注意事项:
1、有许多因素影响抗体从膜洗脱,如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。因此需要优化抗体去除液中孵育膜的时间。
2、确定膜上抗体是否去除与优化抗体去除液孵育膜的时间:用ECL工作液孵育再生后的膜约1分钟,然后进行X光胶片曝光并显影,可确定膜上的抗体是否完全去除。如胶片上显示条带,表明抗体未完全去除,应继续将膜浸泡在抗体去除液中另外孵育30-60分钟。然后再次ECL检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体完全去除并确定最佳孵育时间。
3、使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA封闭的膜上的抗体更容易被去除下来。因此准备进行再生的膜,应该使用脱脂奶粉而不是BSA封闭。
4、尽量避免使用干燥保存的膜,干的膜上的抗体很难被去除干净。
5、PVDF膜上使用的效果好于硝酸纤维素膜。
6、使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。
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