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大鼠ELISA检测试剂盒操作分几个步骤及注意事项有哪些

发布时间:2017-07-28浏览次数:1518返回列表

大鼠ELISA检测试剂盒是目前很多科研人员常用的一种试剂盒,在实验时,应该如何正确操作呢?注意事项又有哪些呢?虽然网上有着很多相关的资料,但都是参差不齐的,这对于很多的科研人员来说都是件其头疼的事,那有没有一种更的解述呢?我们跟随上海樊克生物科技的技术人员一起来讨论下吧!


大鼠ELISA试剂盒的操作步骤,一般来说,应该是这样的:


1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

建议使用的实验方案:

6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。


大鼠ELISA试剂盒操作步骤



大鼠ELISA检测试剂盒的注意事项:

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值于标准品孔孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计3算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。