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其实没那么复杂:疑难样本核酸提取指南
发布时间:2018-08-16浏览次数:1169返回列表
相信大家在研究过程中总会遇到一些「奇葩」样本,他们就像拦路虎一样,总是在找我们的麻烦。DNA 提取得率低,RNA 提出总是降解,这些样本躲又躲不开,绕又绕不过,提还提不出来简直就是烦死个人!
破碎之后我们需要裂解细胞,目前常用的方法有 SDS(十二烷基硫酸钠)法和 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法,SDS 法比较温和,容易保证 DNA 的完整性,而 CTAB 法则较为强烈,当植物样本成分复杂,多糖多酚含量较高时,一般会选用 CTAB 来进行裂解。
有一些样本比较恶心,比如痰液、精液等,这类样本的特点是比较粘稠,提取前需要我们将它们稀释,以痰液的为例,需要加入 DTT(二硫苏糖醇)、Sacomanno 液(乙醇、聚乙二醇、利福平混合液)来液化;而精液 DNA 提取对象大多是精子,需要将精液离心后用 SWB(10 nmol Tris-HCl,10 mmol EDTA,1mol NaCl,pH 7.0)洗涤,接下来利用 SDS、DTT 解离,再用蛋白酶 K 消化。
DNA 提取的下一步是沉淀,而如果使用试剂盒就是上柱。相信许多同学在提取 DNA 的时候都在使用试剂盒,的确,自从核酸提取进入了试剂盒时代之后,我们提取的效率大幅度提升。但是也出现了另一个问题,那就是在有限的样本量的前提下,我们如何能够抓取到痕量的核酸呢?以提取血清血浆样本中的游离核酸为例,常规的试剂盒很难处理这样的情况,需要试剂盒中配备一些特殊组份来捕捉这些游离核酸,并帮助其结合在柱膜上,所以大家在购买试剂盒的时候需要做好选择。