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樊克浅谈：抗肽抗体的制备实验
发布时间：2018-08-23浏览次数：1223返回列表
提高免疫原性肽的抗血清，是zui简单的方法，获得非隔离的蛋白质的抗体，例如，对来自DNA序列信息的推定蛋白质序列。 这种方法也是有用的，当隔离的抗原是困难或费时，或当抗原是一个大的蛋白家族的成员。
实验步骤：
1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中，置于一个2 ml 的玻璃试管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室温下温和搅拌30 min。
2. 加样到PD-10柱子上，上柱前用10 ml 的0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液预平衡柱子。
3. 上样后每0.6 ml 加I为一组分分部收集洗脱液，监测A280并收集一个蛋白峰。
4. 汇集一个峰的洗脱液于15 ml 的玻璃试管中。
5. 将10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中，终浓度约为1 mg/ml。
6. 将其加到装有MBS/BSA复合物的玻璃试管中。
7. 于室温下在，氮气中振摇4 h，于4℃对3 l PBS透析过夜。
8. 换PBS后继续透析4 h。
3. 上样后每0.6 ml 加I为一组分分部收集洗脱液，监测A280并收集一个蛋白峰。
4. 汇集一个峰的洗脱液于15 ml 的玻璃试管中。
5. 将10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中，终浓度约为1 mg/ml。
6. 将其加到装有MBS/BSA复合物的玻璃试管中。
7. 于室温下在，氮气中振摇4 h，于4℃对3 l PBS透析过夜。
8. 换PBS后继续透析4 h。
9. 将样品分装成小份，贮存于-20℃。
