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微生物细菌培养基的制备方法

发布时间:2021-02-23浏览次数:52返回列表

在制备培养基的过程中,首先要使用一些玻璃器皿,如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况,经过一定的处理,洗刷干净。有的还要进行包装,经过灭菌等准备就绪后,才能使用。

1、新购的玻璃器皿

除去包装沾染的污垢后,先用热肥皂水刷洗,流水冲净,再浸泡于1~2%的工业盐酸中数小时,使游离的碱性物质除去,再以流水冲净。对容量较大的器皿,如大烧瓶、量筒等,洗净后注入浓盐酸少许,转动容器使其内部表面均沾有盐酸,数分钟后倾去盐酸,再以流水冲净,倒置于洗涤架上将水空干,即可使用。

2、用过的玻璃器皿培养基制备技术玻璃皿图

凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿,使用后可随时冲洗,吸取过化学试剂的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必须经过适当消毒后,将污垢除去,用皂液洗刷,再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿,可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬-酸钾和浓流酸,其作用是将有机物氧化成可溶性物质,以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用,使用时应特别小心,避免溅到衣服、身体和其他物品上。

二、类型

在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质,都叫做培养基(Media)。由于各类微生物对营养的要求不同,培养目的和检测需要不同,因而培养基的种类很多。我们可根据某种标准,划分为若干类型。

1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分,可分为天然、合成和半合成培养基。

1)天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料,其成分难以确切知道。主要原料有:牛-肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成虽然不能确切知道它的化学成分,但一般来讲,营养是比较丰富的,微生物生长旺盛,而且来源广泛,配制方便,所以较为常用,尤其适合于配制实验室常用的培养基。稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。

2)合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基,它是用已知化学成分的化学药品配制而成。这类培养基化学成分精-确、重复性强,但价格昂贵,而微生物又生长缓慢,所以它只适用于做一些科学研究,例如营养、代谢的研究。

3)在合成培养基中,加入某种或几种天然成分;或者在天然培养基中,加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等。这种培养基在生产实践和实验室中使用zui多。

2、根据物理状态来区分,可以分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。

1)液体培养基 所配制的是液态的,其中的成分基本上溶于水,没有明显的固形物,液体培养基营养成分分布均匀,易于控制微生物的生长代谢状态。

2)在液体培养基中加入适量的凝固剂即成固体培养基。常用作凝固剂的物质有琼脂、明胶、硅胶等,以琼脂zui-为常用,在实际中用得十分广泛。在实验室中,它被用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定等。

3)如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中,就制成了半固体。以琼脂为例,它的用量在0.2~1%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力,有时用来保藏菌种。

3、根据用途来区分,可分为选择、增殖和鉴别培养基。

1)在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的称之为选择培养基。如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长;而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长;结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。

2) 在自然界中,不同种的微生物常生活在一起,为了分离我们所需要的微生物,在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质,以增加这种微生物的繁殖速度,逐渐淘汰其它微生物,称为增殖培养基,常用于菌种筛选和选择增菌中。在某种程度上讲,增殖培养基也是一种选择培养基。

3)在培养基中加入某种试剂或化学药品,使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别,因而有助开快速鉴别某种微生物,称之为鉴别培养基。例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝就是一种常用的鉴别性培养基。

有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。它含有胆盐、乳糖和中性红。胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用(选择性),乳糖和中性红(指示剂)能帮助区别乳糖发酵肠道菌(如大肠杆菌)和不能发酵乳糖的肠道致病菌(如沙门氏菌和志贺氏菌)。

另外,根据营养成分是否“完全”,可以分为基本、完全和补充培养基,这类术语主要是用在微生物遗传学中。根据生产的目的来区分,可以分为种子培养基和发酵培养基。还有专门用于培养病毒等寄生微生物的活组织培养基,如鸡胚等;专门用于培养自养微生物的无机盐培养基等