亲和素-生物素系统在ELISA中的应用

  生物素-亲和素系统(BAS)是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好等优点的信号放大标记技术，BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。生物素易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，再和生物素衍生物结合，将信号多级放大，能保持大分子物质的原有生物活性。

  亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合，现在使用zui多的是从链霉菌中提取的链霉亲和素。链霉亲和素(Streptavidin)是一种可以从链霉菌属细菌 (Streptomyces avidinii )中纯化获得的四聚体蛋白，大小为52800 Da。链霉亲和素又称链霉抗生物素蛋白。生物素广泛分布于动、植物组织中，以卵黄和肝组织含量较高，分子质量244.31 ku。亲和素亦称抗生物素或卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白。

  亲和素与生物素间的结合具有*的亲和力，其反应呈高度专一性，特异性强，亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的敏感度，而且生物素和亲和素一旦结合，就极为稳定，不受在ELISA方法中的保温及多次洗涤影响，而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短;生物素或亲和素与抗体分子或标记物结合后，既不影响前者的亲和力，也不改变后者的特性。亲和素分子的4个活性部位并非都和连接在抗体分子上的生物素残基结合，剩下的游离部位尚可作为另一种生物素标记蛋白质的受体。

  亲和素-生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，也可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，还可以用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，然后连接亲和素-酶结合物，从而使反应信号放大，提高检测的灵敏度。

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