ELISA检测操作注意事项问题及解决方案

  以下是影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案：

  问题：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作?

  解决方案：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

  问题：为什么标准曲线线性较差?

  解决方案：按照推荐方式保存标准品;溶解标准品之前需短暂离心，*收集粉末;确保标准品*溶解和混匀(大约10min)，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且移液;显色的恰当终止;选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。

  问题：ELISA实验为什么必须设置复孔?

  解决方案：为获得准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。

  因为复孔检测可以：

  计算平均值，确保实验结果准确;

  解决实验中误操作造成的跳孔现象;

  计算CV值，对实验的操作和试剂盒的度进行评估。

  问题：为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡?如何振荡?

  解决方案：振荡孵育使反应充分，振荡洗涤使背景干净。建议使用酶标96孔微孔板振荡器。

  孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体间的相互碰撞接触，使得反应过程加*，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高;洗涤过程振荡，可以使洗板干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。

  具体操作请参见说明书或致电研域生物。

  问题：何时终止ELISA反应?

  解决方案：ELISA实验zui终需要酶催化底物显色反应来完成，在zuijia时间终止反应是ELISA实验成功的重要因素。在HRP-TMB酶反应系统中，当zui高浓度标准品颜色不再变深，倒数2-3个浓度标准品颜色开始有浅蓝色时，便需要终止反应;或者也可以根据zui高浓度标准品孔在620nm的OD值来决定，OD620=0.9-0.95之间时即可终止。

  问题：为什么酶标仪读数时必须选用双波长?

  解决方案：首先，酶标仪使用前务必预热10-15min，使测读结果稳定。其次，ELISA实验采用双波长测定吸光度，可以排除单波长检测时的测定干扰(标本的浓度，干扰色等)。一般采用zui大波长作为参照波长，在参照波长下，检测物的吸光值zui小，检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收;因此，双波长测定，可zui大限度的消除指纹、杂质及不透光的物质对酶标仪读数带来的误差，以保证实验数据的准确度

  ELISA检测操作注意事项问题及解决方案上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。