干粉型LB培养基(LB Medium Powder)

  产品及特点：

  LB培养基全名是Lysogeny Broth(非Luria-Bertani),它是由美国科学家Giuseppe Bertani在1951年开发。但现在常用的LB配方是由Miller修改而成,主要是去掉Glucose并把NaCl浓度从0.5 g/L增加到10 g/L。本产品就是根据Miller配方制备的干粉型培养基,本产品加水灭菌后即得液体培养基,即可使用。

  常温运输及保存,有效期两年。

  干粉型LB培养基(LB Medium Powder)操作步骤

  (一)获得目的基因

  1、通过PCR方法:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。

  2、通过RT-PCR方法:用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。

  (二)构建重组表达载体

  1、干粉型LB培养基(LB Medium Powder)载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。

  2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。

  (三) 获得含重组表达质粒的表达菌种

  1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提质粒,双酶切初步鉴定。

  2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。

  3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。

  (四)诱导表达

  1、 干粉型LB培养基(LB Medium Powder)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。

  2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中, 37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。

  3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。

  4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀,用100μl 1%SDS重悬,混匀, 70℃10min。

  5、离心12000g×1min,取上清作为样品,可做SDS-PAGE等分析。

  干粉型LB培养基(LB Medium Powder) 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。