技术资料—石蜡包埋组织microRNA快速提取试剂盒

  古朵生物—石蜡包埋组织microRNA快速提取试剂盒(离心柱型)

  一、原理简介

  改进的异硫氰酸胍/酚一步法裂解细胞和灭活 RNA 酶，然后总 RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，zui后低盐的 RNasefree water 将纯净 RNA(microRNA)从硅基质膜上洗脱。

  二、试剂盒特点

  1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

  2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA 可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

  3. *的 MRL 裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。

  4. 多次漂洗去蛋白过程，提取 RNA 纯度高。

  三、注意事项(实验前必须首先阅读这部分!)

  1. 为防止RNA降解，所有离心步骤如未加说明，均在4℃低温进行。使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf5415C 或者类似离心机。

  2. 裂解液 MRL 中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

  3. 预防 RNase 污染，在实际的操作中应遵循以下指南(参见《分子克隆》)

  * 全程佩戴一次性手套。皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。

  * 使用灭菌的、一次性的塑料器皿和自动吸管抽提RNA，避免使用公共仪器所导致的RNA酶交叉污染。

  * 使用无 RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150°C 的烘箱中烘烤 4 小时，塑料器皿可以在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 分钟，用水*漂洗干净后高压灭菌备用。

  4. 考虑到环保问题，本试剂盒不含有实验室常用试剂，用户使用前需要自备。

  5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析大 RNA 的质量。好的 RNA 产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体 RNA 带，分别为~5Kb(28S)，~2Kb(18S)，条带亮度比值约为 2：1。

  6. 检测 OD260/OD280吸光度比值时，RNA 样品应该溶于 TE 后检测，如果用水稀释后检测，由于一般水离子强度和 PH 值低，会使 OD280升高，从而使比值降低。

  7. 加入裂解液 MRL 匀浆后，加前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。

  microRNA快速提取试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。