古朵生物：脂质体转染的原理与步骤详解

  1、细胞传代

  1)弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。

  2)用移液枪加入1ml胰酶，消化1min(37℃，5% CO2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

  3)加入1ml的含血清培养基终止反应。

  4)用移液枪多次吹吸，使细胞完全分散开。

  5)将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。

  6)用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8 x 106个细胞加入一个35mm培养皿。

  7)将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。

  8)将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。

  2、细胞转染

  1)转染试剂的准备

  A、将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10s，溶解脂状物。

  B、震荡后将试剂放在-20℃保存，使用前还需震荡。

  2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积ul：DNA质量ug)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。

  3)将混合液在室温放置10-15min。

  4)吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。

  5)加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。

  6)到时间后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养继续培养24-48h。

  3、第二次细胞传代

  1)在转染后24h，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。

  2)再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8 x 105个细胞/35mm培养皿将细胞重新分入培养皿中。

  3)在正常条件下培养24h后，按照染色要求条件固定。

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