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使用ELISA试剂盒前应做好的实验前准备
发布时间:2023-06-06浏览次数:664返回列表
使用ELISA试剂盒前应做好的实验前准备
取出ELISA试剂盒酶标板,设空白孔,依照次序对应分别加入100μl的标准品于空白微孔中(空白孔视为0号标准品,用医用蒸馏水替代)
2、分别标记样品编号,加入100μl的稀释样品于空白微孔中(不同的样本采用不同的吸头)。
3、将酶标板置于37℃温育30分钟;
4、将酶标板板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体;
5、每个孔中加满应用洗涤液后,轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
6、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
7、在标准品孔和样品孔中加入100μl的酶标偶合溶液。
8、ELISA试剂盒将96孔板置于37℃温育30分钟。
9、将酶标板取出,将其中的液体甩去,每个孔中全部加满应用洗涤液后,立即甩去液体。
10、每个孔中再次加满洗涤应用液后,室温轻微振摇酶标板30秒后将孔中的应用洗涤液甩去,在吸水纸上将酶标板拍干。
11、重复第5个步骤5次,在吸水纸上将酶标板拍干。
12、在每个孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。轻轻振荡混匀。(A液、B液采用不同的吸头加样)
13、将酶标板置于37℃避光温育反应15分钟。
14、每个微孔中加入50μl的终止液,轻轻振荡混匀。
15、在酶标仪上,450nm处测定OD; 显色后,15分钟内进行测定。
16、根据制备的标准曲线人ELISA试剂盒计算样本含量
四、ELISA试剂盒结 果 判 断
1. 仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值;
2、检测值范围:0-400pmol/L
3、敏感度:1.0pmol/L
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