实验快报：固体样本处理方法

  固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。

  1、组织标本：切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就用液氮研磨，将植物组织放在研钵中，加入适量液氮，充分研磨。

  2、细胞内蛋白样本：

  许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。

  (1)培养的细胞

  A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎)，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  (2)组织的细胞

  切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

  3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

  4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

  5. 植物标本的采集及保存

  1、 称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨;

  2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度过夜;

  3、 于4度，8000rpm，离心1小时，取上清;

  4、 上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是： 80%甲醇(1ml)平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用甲醇(5ml)洗柱→(5ml)洗柱→甲醇(5ml)洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用;

  5、 上样前加入pH7.4 PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心(8000rpm，15分钟)，取上清并暂时保存于4度待用。

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