细胞培养基的成分有哪些?

  合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质。

  氨基酸

  氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨 基酸称为必需氨基酸。其中*是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少*时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有 较大量的*。但是，由于*在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含*的培养液在 4℃冰 箱中储存 2 周以上时，还应重新加入原来量的*。

  碳水化合物

  碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。

  无机盐

  培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个 非常重要的因素, 细胞通常可耐受 260 mOsm/kg~320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质 有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加 HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。

  缓冲系统

  大多数细胞所需pH在 7.2-7.4。但是，细胞培养zui适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4-7.7)，而传代转化细胞 系则需要偏酸pH(7.0-7.4)。由于多数培养液靠*(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲，因此，气相中的CO2浓度应与培养液中*浓度相 平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在 5%，培养液中NaHCO3的加入量为 1.97 g/L;如果CO2浓度维持在 10%，培养液中NaHCO3的 加入量为 3.95 g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。

  HEPES 是一种非离子缓冲液，在 pH 7.2-7.4 范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES 缓冲液 可与低水平的碳酸钠(0.34 g/L)共用，以抵消因额外加入 HEPES 引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培 养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为 pH 指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。

  维生素

  在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源， 但是许多培养基中添加了各种维生素以适合多的细胞系生长。

  其它成分

  在一些较为复杂的培养液中还包括其它一些成分。如在杂交瘤技术中常用的DMEM培养液，使用时还需要补加丙酮酸钠(2-Mercaptoethanol，2-Me)。2-Me对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清，有直接刺激细胞增殖作用。2-Me的活性部分 是硫氢基，其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成*，能诱导细胞的增殖，为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细 胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA合成，增加植物凝集素(PHA)对淋巴细胞的转化作用，已广泛应用于杂交瘤技术，另外，也 开始用于一些难以培养的细胞。2-Me是一种小分子还原剂，极易氧化。分子量为 78.13，纯的 2-Me是一种无色有刺激味的液体，比重为1.110-1.120(Do20)，常用终浓度为 5×10-5M。常配制成 0.1M的储存液，用时每升培养液加 0.5ml。

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