大鼠CXC趋化因子配体1试剂盒实验说明

  l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)的含量。

  l 有效期：6个月

  l 保存条件：2-8℃

  实验原理

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

  样本处理及要求

  1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

  2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

  3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

  注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

  需要而未提供的试剂和器材

  1. 酶标仪(450nm)

  2. 加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  3. 37℃恒温箱

  4. 蒸馏水或去离子水

  大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)试剂盒(ELISA)试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注

  微孔酶标板8孔×12条8孔×6条无

  标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无

  样本稀释液6mL3mL无

  检测抗体-HRP10mL5mL无

  20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

  底物A6mL3mL无

  底物B6mL3mL无

  终止液6mL3mL无

  封板膜2张2张无

  说明书1份1份无

  自封袋1个1个无

  备注：

  1. 标准品浓度依次为：160、80、40、20、10、0 pg/mL

  2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

  注意事项

  1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

  2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

  3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

  4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

  5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

  6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

  7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

  8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

  9. 不能使用过期产品。

  10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

  试剂准备

  试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

  20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

  大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)试剂盒(ELISA)操作步骤

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

  实验结果计算

  以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。

  大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)试剂盒(ELISA)试剂盒性能

  1. 检测范围：5 pg/mL – 160 pg/mL。

  2. 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

  3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

  4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

  大鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)试剂上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。