古朵阐述：多重免疫荧光串色的因素

  随着TSA试剂盒(酪胺信号放大技术)的兴起，多个marker的标记不再是难题，比如CD4 CD8 CD68 CD56 a-SMA 这几个marker的多重免疫荧光组合，能突破传统方法的限制，实现这个组合的同一张切片上的同时标记，但是，要想顺利得到理想的结果，还需要解决一些问题，其中大部分人都会面临一个比较突出的问题：串色。

  出现串色，到底是哪些方面原因导致的?下面根据古朵技术的一些经验简单列举一下：

  1 染料本身激发波长发射波长相隔太近 比如 alexa flour568 和alexa flour 555就很难区分开 (通过目前的一些成像设备很难区分开两种荧光)

  2 成像设备的一些局限 比如荧光显微镜的滤光片 波长比较近，比如cy3滤光片 和texred或者tritc滤光片 cy5滤光片&CY5.5滤光片 会有串色

  3 当染料本身的问题 以及硬件问题都解决了后 可能还会出现串色，这个就属于染色强度不匹配的问题了，比如绿光 曝光2ms(强信号) 红光曝光50ms(弱信号) 这个时候很有可能绿光的信号会延伸至红光

  4  除了以上这些问题 还有可能就是操作失误导致的串色 比如CD4标记后 第二轮修复时做CD8指标时 修复强度不够(未能将CD4在上一轮形成的 一抗二抗hrp复合体完全洗脱掉)这个时候也有可能形成明显的串色 比如CD8 除了有真实的CD8表达 还会有一部分CD4 表达 形成了假阳性CD4(实为CD8的影子)

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