人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒实验说明书

  实验类型：ELISA，酶联免疫吸附测定，双抗夹心法。

  应用范围：免疫学检验，血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本。

  用途

  该试剂盒用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中浓度。

  检测原理

  本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，抗原浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。

  反应类型夹心法

  规格96T

  反应时间4.5h

  反应性通用

  检测方法Colormetric

  灵敏度检测下线除以10

  样本体积100μL

  样本类型血清、血浆或其他相关生物液体

  特异性可检测样本中的指标,且与其它相关蛋白无明显交叉反应

  重复性板内，板间变异系数均<10%

  样品活化方法

  生物样品中的通常以无活性的形式存在，在检测指标活性前必须进行活化处理。

  活化方法如下：

  血清、血浆： 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。

  注意：样品被稀释了10倍!

  细胞培养上清：20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品，混匀，加入40 μL活化试剂1，室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2，混匀后立即检测。

  注意：样品被稀释了2倍!

  组织匀浆：1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品，混匀后检测。

  注意：样品被稀释了50倍!

  度

  板内度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。板间度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。 批内变异系数批间变异系数

  样本123123

  数量202020202020

  平均值( MERGEFIELD 单位ng/mL)0.411.074.960.471.254.24

  标准差0.020.050.220.030.060.2

  变异系数 (%)4.884.674.436.384.84.72

  回收率

  分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围和平均回收率。样本类型回收率范围 (%)平均回收率 (%)

  血清(n=5)94-110102

  血浆(EDTA)(n=5)90-10296

  细胞上清(n=5)95-10698

  线性

  分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白，做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍，4倍，8倍，16倍做回收实验，得出回收率范围及平均回收率。 血清(n=5)血浆(EDTA)(n=5)细胞上清(n=5)

  1:2回收率范围(%)99-10895-10592-104

  平均回收率(%)10510297

  1:4回收率范围(%)95-10990-10097-105

  平均回收率(%)10296100

  1:8回收率范围(%)89-10389-10496-108

  平均回收率(%)9797102

  1:16回收率范围(%)88-10298-10892-105

  平均回收率(%)94104100

  试剂盒组成及保存

  未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。试剂盒组成48孔配置96孔配置

  说明书1份1份

  封板膜2片2片

  密封袋1个1个

  酶标包被板1×481×96

  标准品0.3ml×6管0.3ml×6管

  酶标试剂5 ml×1瓶10 ml×1瓶

  样品稀释液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  显色剂A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  显色剂B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  终止液3 ml×1瓶6 ml×1瓶

  20×浓缩洗涤液15ml×1瓶25ml×1瓶

  试剂盒组成48孔配置96孔配置

  说明书1份1份

  封板膜2片2片

  密封袋1个1个

  说明：所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。

  试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

  操作步骤

  1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。

  2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

  3. 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。

  4. 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。

  5. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

  6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

  7. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

  8. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  9. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  试验所需自备物品

  1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

  2. 移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL

  3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

  4. 吸水纸

  人组织型纤溶酶原激活剂试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。