大鼠弓形虫IgG抗体 Elisa试剂盒说明书

  本产品仅供研究使用

  【试剂盒名称】

  大鼠弓形虫IgG抗体定量检测试剂盒(ELISA)

  【试剂盒用途】

  定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中弓形虫IgG抗体的含量。

  【检测原理】

  本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠弓形虫IgG抗原透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成，颜色的深浅与样品中大鼠弓形虫IgG抗体浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠弓形虫IgG抗体含量。

  【试剂盒组成】

  1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶

  3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶

  5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

  7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

  9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份

  11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个

  【操作步骤】

  1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

  2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

  3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。

  4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

  5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

  6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

  7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

  8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

  9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s(或用手轻轻震荡混匀30s)，37℃避光显色15min。

  10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转)。

  11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。

  12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

  【样本要求】

  1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。

  2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

  3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

  【注意事项】

  1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

  2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

  3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。

  4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。

  5、本试剂盒定量范围为0.5-16U/L，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(0.5-16U/L范围内)，乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。

  6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

  7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要换一次吸头;酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔;不得重复使用封板膜。

  8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

  9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

  【操作程序总结】

  准备试剂，样品和标准品

  加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟

  洗板4次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟

  洗板4次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟

  加入终止液

  15分钟之内读OD值

  计算

  【检测范围】

  0.5U/L - 16U/L

  【规格】

  96人份/盒

  【贮藏】

  2-8℃，避光防潮保存。

  【有效期】

  6个月

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