古朵阐述：琼脂糖凝胶电泳的制备过程

  琼脂糖是实验室常用的试剂之一，但是琼脂糖凝胶电泳的制备过程也不简单，接下来古朵生物技术小编就为大家详细介绍一下制备过程。

  一、用称量纸片电子天平取0.3g的琼脂粉;

  二、配30ML的1*10的TBST缓冲液与100ml的三角烧瓶里;

  三、倒入琼脂粉摇匀，并转到微波炉中加热溶解;

  四、用手套取出到凉水稍稍晾凉至温热后(约60℃)，加入核酸酶(Eb替代物)2ul;要边加边摇匀，使之充分摇匀;

  五、取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干，放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好，形成模子。

  将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上，使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。

  室温下静置直至凝胶凝固,垂直轻拔梳子，取下胶带，将凝胶及内槽放入电泳槽中。

  注意：制备过程中请戴好手套;梳齿处不可存在气泡，液面应保持平整无波纹。

  开始跑胶

  一、胶凝后取胶放到电泳槽中，倒入电泳液至浸过凝胶。

  二、从冰箱中取出MARK和loading buffer，加入6ULloading buffer到样品中混匀;然后用加样枪分别加到凝胶的大孔中(要缓慢加，不要穿破凝胶，后枪不要打尽以至于有空气使样品吹打出来);MARK加到小孔中的任一孔(记住位置)。

  三、盖上电泳槽，加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60-100V，样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动，电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低，当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。

  四、使用凝胶成像仪拍照，观察条带(mark或样品是否有条带显示)。

  观察方法

  电泳时间依据实验的具体要求而定，在电泳中途可以使用紫外灯直接观察，也可以根据指示剂确定条带的迁移位置，各条区分开后电泳结束，取出凝胶直接检测拍照。

  拿到胶体条带图谱后，找到marker，根据marker就可以确定目标条带了。

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