仓鼠E选择素酶联免疫试剂盒操作步骤

  仓鼠E选择素酶联免疫试剂盒 试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中SELE 表达。用纯化的SELE 抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中SELE 相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与 HRP 标记的SELE 抗体结合，形成抗体 抗原 酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中SELE 的存在与否。

  操作步骤：

  1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)

  2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50%l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40%l，然后再加待测样品 10%l。加样将样品加 于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

  3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

  4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

  5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

  6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50%l，空白孔除外。

  7. 温育：操作同 3。

  8. 洗涤：操作同 5。

  9. 显色：每孔先加入显色剂 A50%l，再加入显色剂 B50%l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50%l，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

  11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

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