酶联免疫试剂盒

  ELISA(酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒) (以下简称ELISA(酶联免疫吸附试验，酶联免疫试剂盒)) ：是酶免疫测定技术中应用广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA(酶联免疫吸附试验)法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。

  种类

  Elisa 洗板主要有：

  (1)自身免疫检测试剂盒，包括ELISA和IFA类诊断试剂;

  (2)细胞因子ELISA试剂盒，包括人、大鼠、小鼠、兔、狗、羊、猴子、猪、豚鼠、马类血清、尿、细胞培养上清液检测试剂盒;

  (3)流式细胞仪用试剂类，包括CD系列、细胞因子系列等;

  (4)乳胶手工及上机试剂，包括透光比浊检测试剂;

  (5)内分泌检测试剂盒，包括微色谱柱类检测试剂;

  (6)肿瘤标记物检测试剂;

  (7)微生物传染病检测试剂，包括性病类及其它传染病类检测试剂;

  (8)实验室仪器类，包括BTS-330大屏幕半自动生化分析仪、MiniNeph微量蛋白散色比浊仪及相关试剂;

  (9)pcr及相关试剂;

  (10)肝纤维化检测;

  (11)单克隆抗体;

  (12)ELISPOT：细胞因子的全新解决方案;

  (13)特种蛋白;

  (14)微色谱柱;

  (15)优生优育TORCH;

  (16)生化试剂;

  (17)抗体;

  (18)细胞株;

  (19)其它分子生物学研究用试剂。

  使用

  标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积=100ul×检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。样品采集：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。临床及科研样品 ELISA 检测服务操作步骤、灵敏度、测范围(RANGN)可以参照说明书产品用途: 科研ELISA检测试剂盒.提供实验代测服务.产品范围: 人,小鼠,大鼠,猪,兔,其它动物细胞因子;细胞凋亡,活性多肽、自身抗体 ,血栓与止血。

  试剂盒的类型

  根据ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)所用的固相载体而区分为三大类型：一是采用聚苯乙烯微量板为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)，即我们通常所指的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(微量板ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒));另一类是用硝酸纤维膜为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒),称为斑点ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(Dot-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒));再一类是采用疏水性聚脂布作为载体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)，称为布ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(C-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒))。在微量板ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)中，又根据其性质不同分为间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、双夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、竞争ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)、阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)及抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)。

  吸附试验

  1.间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例，间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的操作程序如下。(1) 材料① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清;

  ③ ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。(2) 方法步骤① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干

  ④ 加底物液 → 37℃ 30分钟，加终止液⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。(3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。

  2.双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例介绍本法的操作程序。① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加终止液⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

  3.双夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法与双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液⑥ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

  4.竞争ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。

  其基本程序为：① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原(对照孔仅加酶标抗原)→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液④ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

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