小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒原理及操作方法

  实验原理：

  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。

  往预先包被肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。

  用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，计算样品浓度。

  操作步骤

  1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

  2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

  3. 样本孔中加入待测样本40μL;空白孔不加。

  4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

  5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

  6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

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