大鼠血管内皮细胞RAOEC培养说明书

  一、细胞培养条件

  细胞名称大鼠血管内皮细胞RAOEC

  生长特性贴壁生长冻存条件无血清冻存液

  培养体系DMEM+10%FBS+1%双抗

  传代方法次建议1:2传代 传代情况2天换液

  备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡对比培养

  如果对比培养效果不好，建议直接购买我们的完全培养基

  二、细胞收到后处理

  培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存(好40x,100x,200x各一张)，前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后将盖子拧松)。

  三、细胞培养步骤

  a、细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养;如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下：

  1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2. 添加1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA)至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。

  3.轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养基重悬。

  4. 将细胞悬液按1：2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶)，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，后放入到37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

  b、细胞冻存：

  1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次;

  2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心 5min;

  3、 弃上清，沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号：C7001)，混匀后加入冻存管中。

  4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上再转入液氮罐中。

  C、细胞复苏：

  1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具)，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

  2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min;

  3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

  4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

  四、注意事项：有些细胞贴壁不牢，在运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。可按此方法：将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养(后期对比培养)，沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25)，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

  大鼠血管内皮细胞RAOEC培养说明书

  五、售后条款：

  1)细胞出现问题，可重发的情况有哪些?判定标准是什么?

  1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发;

  2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发;

  3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，(需提供真实清晰的细胞状态照片)，重发;

  4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发;

  5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发;

  6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

  大鼠血管内皮细胞试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒