人β神经生长因子(NGF-β)酶联免疫试剂盒技术资料

  包装描述：

  试剂名称数量试剂名称数量

  96孔板(预包被)196孔板覆膜2

  标准品2标准品稀释液1×20mL

  检测溶液A1×120μL检测稀释液A1×12mL

  检测溶液B1×120μL检测稀释液B1×12mL

  TMB底物1×9mL终止液1×6mL

  浓洗涤液(30×)1×20mL说明书1

  测定步骤总结

  1.准备所有试剂，样品和标准品;

  2.向每个孔中添加100µL标准液或样品。在37℃下孵育2小时;

  3.吸出并加入100µL准备好的检测试剂A。在37℃孵育1小时;

  4.吸净并清洗3次;

  5.加入100µL制备的检测试剂B。在37℃孵育1小时;

  6.吸气并清洗5次;

  7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分钟;

  8.添加50µL终止液。立即在450nm处读取。

  需自备的设备及试剂

  450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

  单道或多道微量加液器及吸头

  稀释样品的EP管

  蒸馏水或去离子水

  吸水纸

  盛放洗液的容器

  试剂盒的储存及有效期

  未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

  使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

  稳定性

  经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。

  为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

  注意：

  试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

  ELISA实验常见问题分析

  ELISA实验因灵敏度高，特异性强在生物科研上得到了广泛的认可，但对初学者而言，如不注意实验操作过程中的各个环节，可能会对终的实验结果产生比较大的影响，比如实验出现白板，显色弱灵敏度低，花板无梯度背景高等现象。下面对以上实验现象进行一一解析。

  1.白板现象

  在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中所有孔的颜色均为无色，即无信号呈现。

  出现该现象的可能原因：

  a.试剂已过保质期，不同批次稀释液交叉使用。

  b.错加漏加检测A，检测B或者底物溶液TMB。

  c.洗板或者加样过程中，酶标记物被污染失活，稀释液中含有酶抑制剂如叠氮呐等。

  d.配置稀释液的蒸馏水可能被污染。

  e.洗涤液是浓缩型的，没有按比例进行稀释。

  f.酶标记物的活性和效价比较低。

  g.溶液的PH值不正确，一般稀释液的PH值应保持在7.2-7.4。

  2.显色弱灵敏度低

  在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。

  出现该现象的可能原因：

  a.产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。

  b.试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。

  c.少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。

  d.洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。

  e.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。

  f.洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。

  g.底物溶液TMB显色时间太短。

  3.花板无梯度背景高

  在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景也可能较高.

  出现该现象的可能原因：

  a.底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝。

  b.孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。

  c.没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了。

  d.加样时没有换枪头造成交叉污染。

  e.花板现象：低浓度或者低活性的包被抗体或者检测抗体，封闭不足导致的本底不稳定，洗板不充分，包被板子的问题。

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