古朵带您了解哪些指标评估来判断ELISA试剂盒的质量呢

  01  特异性

  特异性简单来说就是阴性样本的阴性检出率，要保证这一点首先就需要做到与其他检测抗体(原)无交叉感染，并且保证阴性样本检出的准确性。

  02  灵敏度

  灵敏度简单来说就是阳性样本的阳性检出率，一方面能够反映出试剂盒对于被检物质的低检测能力，另一方面需要保证阳性样本检出的准确性。可通过我们自身待检物质的性质进行选择，如果我们待检物质浓度量很低，可以选择高灵敏的试剂。

  03  性

  又可称作重复性，一般而言，对于ELISA试剂盒而言，板间及板内性可控制在15%以内。有些ELISA试剂盒性可达到10%以内。

  04  稳定性

  稳定性是试剂盒必须有的基本属性，是指试剂(盒)在有效期内和规定条件下保持其性能的能力，一般有效期稳定性、运输稳定性、以及冻融稳定性。

  05  操作简便性

  同样对于ELISA的操作简便程度大家也是非常关心的，操作时间以及操作步骤也是我们在选择试剂盒过程中需要考虑的问题。

  二、取材方法及注意事项

  a、液体样本 液体样本处理原则：所有的液体样本，用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，如果以后遇到其他的液体样本，也按这个方法，纳入汇总表。

  1、血清：用无菌管收集，室温血液自然凝固10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

  2、血浆：应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

  3、尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  4、胸腹水：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  5、脑脊液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  6、唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  7、细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  8、牛奶：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

  9、蜂蜜：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。10、全血：用含有抗凝剂的无菌管收集，立即轻轻摇动，来回轻轻颠倒数次，使血液和抗凝剂混匀，以防血液凝固。

  b、固体样本 固体样本处理原则：称取1g的固体样本，用9g的合适缓冲液溶解，分泌蛋白可以直接离心取上清检测，细胞内的蛋白，要先收集细胞，再用合适方法破碎，离心取上清测试。

  1、组织标本：切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。对于植物组织，不好匀浆的话，就在液氮中充分研磨;

  2、细胞内蛋白样本许多待测蛋白不是分泌蛋白，而是存在于细胞内的蛋白，这个时候，要先收集细胞，洗涤干净，再破碎细胞，离心取上清。(1)培养的细胞A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融，破碎效果不好，就采用超声波破碎)，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度达到100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方式，充分破碎细胞，以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。(2)组织的细胞切割标本后，称取1g组织，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

  3、土壤：称取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

  4、咽拭子：加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子头部，摇匀，用镊子取出咽拭子并挤干液体，2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清。分装一份待检测，其余冷冻备用，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。如果是测分泌蛋白，直接取上清检测，测试细胞内蛋白，要破碎细胞。

  5. 植物标本的精采集及保存1、称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本，在液氮中充分研磨;2、加入1ml的提取液(80%甲醇),置于-20度过夜;3、于4度，8000rpm，离心1小时，取上清;4、上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是：80%甲醇(1ml)平衡柱上样收集样品移开样品后用甲醇(5ml)洗柱(5ml)洗柱甲醇(5ml)洗柱循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干，保存备用;5、上样前加入pH7.4PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟，然后4度离心(8000rpm，15分钟)，取上清并暂时保存于4度待用。

  c.植物标本中相关酶或蛋白的测定：(粗提取)

  1、新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;

  2、加入样品体积9倍的提取液(pH7.4PBS缓冲液);

  3、请于4度，8000rpm，离心30分钟，取上清并暂时保存于4度待用。

  三、样本收集注意事项

  1、不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2、标本采集后尽快进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

  3、我们罗列的是通用的样本处理方法，无法涵盖各种样本，对于一些特殊样本，建议实验人员多参考已发表的文献，自行设计合理的样本处理方法。

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