ELISA试剂盒操作步骤及试剂盒类型总结

  ELISA试剂盒操作步骤的检测

  在ELISA试剂盒中用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。ELISA试剂盒板孔的吸附面积约为200mm2，小珠均为1000mm2，将近ELISA板孔的5倍。吸附面积的增大即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度有利于吸附的抗原决定簇或抗体结合位点的暴露面处于佳反应状态。

  因此珠式ELISA试剂盒的反应往往为灵敏。小珠的另一特点是易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。用于EILSA的产品称为ELISA板，上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测，有制成8联孔条或12联孔条的，放入座架后，大小与标准ELISA板相同。ELISA试剂盒板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴定板型的ELISA试剂盒检测，包括加样、洗涤、保温、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯经射线照射后，其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加，应用于双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。

  良好的ELISA试剂盒板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA试剂盒板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异很大，因此，每一批号的ELISA试剂盒板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体，保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。

  ELISA试剂盒主要有以下几种类型：

  ELISA实验的原理和常见办法。ELISA试剂盒可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

  根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于科研检验的

  1.双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原常用的方法。

  操作步骤如下：

  1将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

  2加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

  实验原理：

  1.包被：抗原/抗体，固相化

  2.反响：1 待测抗体/抗原; 2 酶标抗原/抗体

  3.洗涤：使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的别离

  4.底物显色：定性/定量剖析

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