细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂盒产品说明书

  主要用途

  细胞糖原硫酸蒽酮比色法定量检测试剂是一种旨在通过乙醇去脂、酸化水解等处理后，水解产生葡萄糖单体，与硫酸蒽酮反应，生成蓝绿色产物，即采用比色法测算糖原含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种细胞(动物、人体、植物等)裂解悬液样品糖原含量的检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。

  技术背景

  糖原(glycogen)是以α-1,4主链，α-1,6旁链形式的葡萄糖多聚体。作为动物体内主要的短期能量储备分子，糖原由肝脏和肌肉生成，并存在于皮肤、肝脏、甲状旁腺(parathyroid gland)、骨骼肌和心肌中。异常利用糖原常见于糖尿病和遗传性糖原存储疾病( genetic glycogen storage disease ) 等。基于蒽酮(9,10-Dihydro-9-oxoan-thracene;Anthranone)可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸发生反应的原理，糖原分子受到酸性水解后，产生葡萄糖，与硫酸蒽酮反应，生成蓝绿色产物，在分光光度仪(620nm 波长)下出现吸光峰值的变化，来定量测定样品中糖原的含量。

  产品内容

  清理液(Reagent A) ml

  碱性液(Reagent B) ml

  水解液(Reagent C) ml

  萃取液(Reagent D) ml

  净化液(Reagent E) ml

  酸性液(Reagent F) ml

  染色液(Reagent G) ml

  标准液(Reagent H) μl

  说明书1 份

  保存方式

  保存在4℃冰箱里;试剂具有腐蚀性，注意操作安全; 染色液(Reagent G)避免光照;有效保证6 月

  用户自备

  1.5 毫升离心管：用于标准样品配制和反应的容器

  2 毫升离心管：用于样品操作的容器

  15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

  细胞刮脱棒：用于贴壁细胞脱离

  (微型)台式离心机：用于样品制备

  干式恒温仪或恒温水槽：用于反应孵育

  比色皿：用于比色的容器

  2

  分光光度仪：用于比色分析

  实验步骤

  一、样品准备

  1. 准备好25cm2 细胞培养瓶或60mm 细胞培养皿的待测培养细胞(1X 106 细胞)

  2. 小心加入xx 毫升清理液(Reagent A)，覆盖生长表面

  3. 小心抽去清理液

  4. 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞(注意：可以使用胰酶消化)

  5. 加入xx 毫升清理液(Reagent A)，混匀细胞

  6. 移入到预冷的15 毫升锥形离心管(注意：悬浮细胞从这一步骤开始)

  7. 放进4℃台式离心机离心5 分钟，速度为300g

  8. 小心抽去上清液

  9. 加入xx 微升碱性液(Reagent B)

  10.涡旋震荡15 秒

  11.转移到2 毫升离心管

  12.放进100℃干式恒温仪孵育10 分钟

  13.放进冰槽里孵育5 分钟

  14.加入xx 微升预冷的水解液(Reagent C)

  15.涡旋震荡15 秒

  16.加入xx 毫升萃取液(Reagent D)

  17.置于冰槽里孵育30 分钟

  18.放进4℃微型台式离心机离心10 分钟，速度为3000g(或5500RPM，例如eppendorf 5415)

  19.小心抽去上清液

  20.加入xx 毫升净化液(Reagent E)

  21.涡旋震荡15 秒

  22.放进4℃微型台式离心机离心10 分钟，速度为3000g(或5500RPM，例如eppendorf 5415)

  23.小心抽去上清液

  24.加入xx 微升酸性液(Reagent F)

  25.涡旋震荡15 秒

  26.放进100℃干式恒温仪孵育10 分钟

  27.放进冰槽里孵育5 分钟

  28.即刻置于冰槽里备用

  二、标准样品配制

  1. 准备好5 个1.5 毫升离心管，标记为1 至5 号管

  2. 分别加入xx 微升清理液(Reagent A)到每个离心管

  3. 移取xx 微升标准液(Reagent H)到1 号管，混匀

  4. 小心移取xx 微升1 号管稀释的标准液(Reagent H)到2 号管，混匀

  5. 小心移取xx 微升2 号管稀释的标准液(Reagent H)到3 号管，混匀

  6. 小心移取200 微升3 号管稀释的标准液(Reagent H)到4 号管，混匀

  7. 将1 至5 号管放进冰槽里备用，避免光照;标准管浓度见下表

  3

  管号标准液(Reagent H) 清理液(Reagent A) 标准葡萄糖浓度

  1 xx 微升xx 微升xx 微克/毫升

  2 xx 微升1 号管xx 微升xx 微克/毫升

  3 xx 微升2 号管xx 微升xx 微克/毫升

  4 xx 微升3 号管xx 微升xx 微克/毫升

  5 —— xx 微升0

  三、样品测定

  1. 设定好分光光度仪：波长620nm，并置零

  2. 分别移取xx 微升染色液(Reagent G)到1.5 毫升离心管

  3. 分别加入200 微升上述制备的标准样品或待测样品

  4. 上下倾倒混匀

  5. 煮沸10 分钟

  6. 室温下冷却10 分钟，避免光照

  7. 转移到新的比色皿

  8. 即刻放进分光光度仪检测(620nm 波长)：获得吸光读数

  9. 构建标准曲线：纵座标(Y 轴)为吸光读数;横座标(X 轴)为标准葡萄糖浓度(微克/毫升)

  10.根据标准曲线获得样品对应葡萄糖浓度(微克/毫升)

  11.计算样品实际葡萄糖浓度(微克/毫升)

  注意事项

  1. 本产品为25 次操作，包括标准液

  2. 操作时，须戴手套

  3. 试剂具有腐蚀性，注意操作安全

  4. 孵育时，避免光照

  5. 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品用量;注意在计算实际浓度时，不要忘记调整计算公式

  6. 糖原浓度表述方式：

  7. 本公司提供系列医学生化检测试剂产品

  质量标准

  1. 本产品经鉴定性能稳定

  2. 本产品经鉴定检测敏感

  ELISA试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒