ELISA实验结果不显色是什么原因导致

  有很多一些新手ELISA试验人员来说，试验做得不理想是难免的事。这不，就在近期一个朋友找古朵生物小编咨询。这位朋友说道：“初度用间接法做ELISA试验，做了几回结果都没有显色，原因在哪里呢”

  可能原因一：

  1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时;

  2.关闭：关闭液用的是否合适?你说做了几回都没显色，空白孔也不显吗?假如空白也无色彩，那关闭就没有问题。一般关闭是200微升每孔，也能够满孔关闭

  3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反响

  4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好查看!

  5.洗刷：用PBST洗刷，包被和关闭时洗板3次;一抗二抗洗刷5次，每次间隔3分钟。手工和机器洗刷没什么不同，就是省力一些。洗5次不会有负影响，在一抗和二抗洗刷过程中，恰恰需求多洗几回，这样有助于削减非特异性吸附

  可能原因二：

  1、阳性对照不显色

  漏加阳性对照

  阳性对照孔忘加酶或忘加显色剂

  阳性对照受污染

  2、阳性对照显色浅(HBeAb HBcAb阴性对照显色浅)

  试剂和保存不当、活性下降

  在使用前试剂盒未放置在室温平衡

  温育时间不够或孵育温度过低

  洗板浸泡时间过长、洗板次数过多

  使用不正确的洗液

  洗液中含有防腐剂同时残留量过多

  洗板后酶标板被干透

  读数时使用波长不正确

  滤光片不清洁或滤光片位置错误

  读数时酶标板放置位置错误

  阳性对照活性下降

  酶标失活

  3、阴性对照显色(HBeAb、HBcAB除外)

  实验过程受污染

  阴性对照污染

  酶滴在孔壁上

  4、整板不显色

  试剂和保存不当、已经失活

  忘记加酶、可检查滴瓶内酶量

  忘记加抗原或中和试剂

  忘记加显色剂A或显色剂B

  5、阳性对照读数不正常

  加入标本后未进行必要的混匀

  标本稀释错误

  加样量不正确

  冷冻标本未完全溶解混匀

  标本中含有防腐剂

  6、血清本底高

  试剂盒灵敏度高

  加样时使用同一枪头、交叉污染

  孵育时间过长或温度过高

  洗板次数不足，浸泡时间短

  洗板时洗液量少或残留量多

  洗板时洗液量过多、串孔

  洗板机管道中有霉菌生长

  洗液瓶混用

  洗板机洗板头阻塞或洗板机洗板头位置错误

  配置洗液的去离子水或蒸馏水被污染

  终止液浓度不够，没有充分混匀，或终止液被污染

  读数时酶标板底部有水蒸气凝结

  酶标仪偏差

  7、假阳性结果

  实验器具被污染

  血清中出现纤维蛋白凝集

  血清标本中出现过多的红细胞

  血浆标本处理不当

  标本中含有灰尘、颗粒或细菌等

  标本被反复冻融

  加标本后进行不正确的振荡

  沿孔壁上加入标本，加样后出现过多的气泡

  酶标滴加在孔壁上，洗板未洗净

  混用洗液或洗液稀释错误

  洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌

  洗板次数不足或浸泡时间短

  洗板时洗液量少或残留量多

  洗板时洗液量过多、串孔

  读数时酶标板底部有水蒸气凝结

  洗液瓶、废液瓶混用

  读数过程中板孔中有气泡

  酶标仪偏差

  8、同一板内重复性差

  标本混匀不充分

  试剂混匀不充分

  标本与酶结合物混匀不充分

  加样技术差异

  加样器故障或加样器被污染

  加样时间过长导致孵育时间不同

  孵育器内部的温度不一致，造成酶标板孔间的孵育温度差异

  读数时酶标板孔间有气泡

  9、HCV血清本底高

  灵敏度高

  样本稀释液加液量不足100ul

  枪头深入血清过深，致使外壁沾有血清导致加样偏多(>10ul)

  同一孔加了两次样本

  其他可能原因参考HBsAg

  10、HIV阳性对照低

  误将阳性对照稀释

  阳性对照未混匀

  加液量不足

  其他可能原因参考HBsAg

  11、HIV血清本底高

  标准变，灵敏度提高

  标本稀释液加液量不足100ul

  枪头深入血清过深，致使外壁沾有血清导致加样偏多(>10ul)

  同一孔加了两次样本

  其他可能原因参考HBsAg

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