古朵小课堂：ELISA试剂盒为什么重复性差?

  主要有两方面：

  一是实用性，看看你这方法是否实用，是否能够推广，如果你只想在自己的实验室用一用，也可不必考虑这一方面;

  二是可靠性，评价可靠性的主要指标有检测限、线性范围、回收率、重复性与重现性等等。可靠性是必须评价的。

  ELISA试剂盒重复性与重现性的区别与联系?

  重复性(repeatability)与重现性(再现性，reproducibility)，二者都是用来评价分析结果的度。大多数人都不作严格区分，有的文献中还常常混用。但是二者的实际意义是不一样的。

  重复性：是指同一分析人员在同一条件下所得分析结果的度，

  重现性：是指不同分析人员或不同实验室在各自的条件下所得分析结果的度。也就是说，重现性比重复性提出了高的要求。重复性好，重现性未必好。而重现性好，重复性肯定好。二者都是用多次分析结果的RSD来表示。

  对现代仪器分析而言，重复性是容易实现的，而重现性是重要的，也是方法验证必须考察的。

  方法的重现性包括连续多次进样分析的重复性、不同天数间的重复性、不同型号仪器间的重现性和不同实验室间的重现性。

  可能存在的原因有：

  1. 试剂盒储存不当或储存环境差。您应按照数据表上的建议储存所有组分，而不是在室温下过长时间。

  2. 标准的制备不正确。您应根据试剂盒的方案，使用推荐的稀释剂严格重构标准。在使用前的10分钟内准备好试剂，并迅速加入孔中。

  3. 添加样本后混匀不充分。当同时添加多个试剂时，您应在涡旋混合器中充分混合试剂。在持有试剂时要小心，避免溅出。

  4. 孔读数重复性差。您应校准酶标仪。

  5. 孵育时间、洗涤条件、显色条件和操作者不一致。您应重复标准的实验。确保反应条件和操作者一致。

  6. 洗涤不当。您应使用移液管加入200μL的洗涤缓冲液，或者用移液管充分填满每个孔，但不允许溢出。检查酶标板洗涤器的所有孔口，确保充分的洗涤。

  7. 温度不均匀。您应在孵育期间保持恒定温度，避免温度波动。

  8. 加样本时壁面残留过多或移液管尖划伤孔底。您应缓慢、小心地将移液管尖沿孔壁降低，避免触碰孔底。

  9. 重复使用材料。您应在样本之间换移液管尖，在试剂之间换储液器。

  10. 偶尔在截断值附近出现的阳性和阴性值。您应对同一样本设置3个重复测量，并在2个样本中获得相同的结果。

  11. 加样本时的交叉污染。您应在添加样本时避免交叉污染。

  ELISA试剂盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒