Elisa实验：谷胱甘肤ELISA测定实验

  谷胱甘肤ELISA简介:

  谷胱甘肤 (glutathione,r-glutamyl cysteingl tglycine，GSH) 是一种含-酷胺键和统基的三肤，由氨酸、半胱氨酸及台氨酸组成，存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肤能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用半胱氨酸上的流基为其活性基团(故常简写为G-SH)，易与某些药物、毒素等结合，使其具有整合解毒作用。

  谷胱甘肤试剂盒操作步骤:

  材料准备

  1. 包被液: 0.05 mol (pH9.6) 碳酸盐缓中液: Na2C03 0.159 g,NaHCO3 0.294 g，用蒸水溶解后，定容至100ml.

  2.PBS-T洗涤液: 0.01mol/ pH7.4磷酸盐-复化钠缓液: NaC1 8.0 g, KH2P04 0.2 g,Na2HP04·12H20 2.9 g,KCI0.2 9，吐温-20 0.5 l，用蒸馏水溶解后，定容至1000 ml。

  3.底物溶液3，3”，5,5-四甲基联苯胺 (TMB) 贮存液及应用液:(1) 0.1 mol pH6.8 PB: Na2HPO4·12H20 1.09 g, NaH2P04 H20 6.05 g,蒸水溶解后定容至500 ml，4°C保存备用。

  (2) TMB贮备液: TMB 60 mg 于10 ml二甲基亚硕 (DMSO) 中4C保存备用(3) TMB应用液: 临用前取0.1 moll pH6.0 PBS 10 ml，TMB备液100 l，30%H202 15 l混约即可

  谷胱甘肤ELISA实验步骤：

  1.抗体包被

  (1)抗体用包被液稀释至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反应板中每孔100 ul，加盖后放4C过夜(2) 倾去孔内液体，加入洗涤液后静置3 min，倾尽洗涤液，重复洗涤3次。

  (3) 将反应板口在吸水纸上，以除尽液体。

  2.封闭: 每孔加入200 ul闭液，37“C孵育60 min，然后洗涤3次。

  3.加入待测血清，37“C温育1~2 h，洗涤3次。用稀释液作对照孔，标准曲线的制备是用不容稀释度的纯GST-T。加酶标抗体: 按要求稀释抗GST--gG-HRP，每100 l，37C温育1 h，然后洗涤5次，扣在吸水纸上吸干水分

  5.显色: 加入TMB应用液，置室温反应15-30 min，加入50 ul2 mol H2S04，稳定3-5 min，即可比色

  6.比色:用酶标仪，以PBS-T孔为对照，波长450 nm，测各孔光吸收度(A)，查标准曲线，即可测得GST-T含量.

  谷胱甘肤ELISA上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。