48t/96t 皮质醇(COR)ELISA试剂盒（猴，牛，鸡）

皮质醇(COR)ELISA试剂盒（猴，牛，鸡）组成及试剂配制：
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

皮质醇(COR)ELISA试剂盒（猴，牛，鸡）标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
3.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可向客服索取说明书
4.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中 先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
6.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
7.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
8.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
9.温育：操作同3。
10.洗涤：操作同5。
11.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
12. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
13. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。


皮质醇(COR)ELISA试剂盒（猴，牛，鸡）注意事项：
1.实验严格按照说明书的操作进行，实牛胰岛素受体底物2(IRS-2)ELISA检测试剂盒验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2.酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3.建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4.若显色过浅，可适当延长底物温育时。
5.标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
6.冻结标本溶解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠混合，不要在混匀器上强烈震荡。
7.浑浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
8.反复冻融会使蛋白效价降低，所以代测样本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。



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