1、色谱柱的平衡
    反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。 每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得大的”补偿”，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！操作步骤：
    平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）
    如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡； 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。
    2、色谱柱的再生
    长期使用的色谱柱，往往柱效会下降（柱子的理论塔板数减低）。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。
    3、色谱柱的维护
    使用预柱保护分析柱（硅胶在性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）；
    大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围；
    避免流动相组成及性的剧烈变化；
    流动相使用前必须经脱气和过滤处理；
    如果使用性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇或乙腈中；
    氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性，故使用时要注意，柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂，以避免腐蚀。