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公司名称:赫澎(上海)生物科技有限公司

联系人:张硕

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人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒赫澎生物新品发布,一步酶免法

发布时间:2017-07-26浏览次数:1571返回列表

赫澎(上海)生物有限公司
He Peng (Shanghai)Biotechnology Co.,Ltd.
销售部:
张硕:
QQ:1438227360
王霞:
QQ:3418426269
微信号:
固话 :
传真 :
邮箱 :hepeng20160718@foxmail.com
网址 :www.hepengbio.com
使用说明书
检测原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被钙调素(CAM)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙调素(CAM)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并样品均匀地充分解冻。
自备物品:
酶标仪(450nm)
加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
操作注意事项:
试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完溶解后再使用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,终结果乘以5才是样本实际浓度。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成:

注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、3、6、12、24、48μg/mL
试剂的准备:
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法:
手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步骤:
从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。设置标准品孔和样本孔,标准品孔加不同浓度的标准品50μL;样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;孔不加。 除孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物A、B50μL,37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定孔的OD值。
结果判断:
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算样本浓度值。
试剂盒性能:
性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
灵敏度:检测浓度小于1.0μg/mL。
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
贮藏:2-8℃,避光潮保存。
有效期:6个月
免责声明:
试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的后果,由实验者承担,本公司概不负责。
严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。

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