巨细胞病毒（CMV） IgM ELISA试剂盒

巨细胞病毒(CMV)是一种疱疹病毒。是引起先天性变态反应性疾病和接受大量输血及免疫抑制疗法患者中并发症的主要的生物学因子。约有一半的孕妇初期感染后就把此病传给胎儿。当胎儿在子宫内感染后，可引起智力发育迟缓、致盲或致聋。

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 一、巨细胞病毒试剂盒用途及检测方法简述

巨细胞病毒(CMV)是一种疱疹病毒。是引起先天性变态反应性疾病和接受大量输血及免疫抑制疗法患者中并发症的主要的生物学因子。约有一半的孕妇初期感染后就把此病传给胎儿。当胎儿在子宫内感染后，可引起智力发育迟缓、致盲或致聋。

把纯化了巨细胞病毒抗原包被在微孔表面。加入经稀释的患者血清样品。若其中存在CMV IgM抗体，它与包被的抗原结合成为抗原-抗体复合物，用水洗去未结合物后加入底物和显色剂，所产生颜色的强度与样品中的抗体的量成正比。其结果通过酶标仪在平行检测中与临界校正液和对照品相比较而得出。

二、巨细胞病毒试剂盒试剂盒的组成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1块

2．酶联试剂：12mL，1瓶，(红色液体)

3．样品稀释液：22mL，1瓶，(蓝色液体)

4．阴性对照：150µL，1瓶，(无色盖)

5．临界校正液：150µL，1瓶，(黄色盖)

    CMV IgM指数=1.0

6．阳性对照：150µL，l瓶，(红色盖)

7．洗涤浓缩液(20X)：50mL，1瓶

8，TMB试剂(一步)：11mL，1瓶

9．终止液 (1N HCL) ：11ml,，1瓶

三、巨细胞病毒试剂盒的保存和仪器

1．试剂盒在2-8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥剂的密封袋中。

3．试剂盒在有效期内是稳定的。

4．试剂盒中的试剂在保存或使用期间，应避免暴露在热、阳光和强烈光线之中。

*警示与注意

1．试剂盒的某些材料中可能含有潜在生物危险的组分，应按微生物学和生物医学实验室有关生物安全的规定进行操作和处理。

2．本剂盒仅适用于实验室。

3．勿用嘴吸移液管；禁止在样品和试剂盒试剂操作区吸烟、吃东西。

4．本试剂盒中的各组分是一个完整的单位，不同 批号的试剂盒中的组分不能混用。

5．本试剂盒试剂中含有防腐剂叠氮化钠。叠氮化钠会与铅、铜形成爆炸性的金属化合物。

   处理：用大量水冲洗。

四、巨细胞病毒试剂盒样品的采集和制备

1．采集血样并分离血清。

2．采集的样品在2-8℃下可保存7天。冰冻状态下可保存6个月。血清样品要避免反复冻融。

五、巨细胞病毒试剂盒试剂的准备

1．使用前使全部样品和试剂达到室温(18-25℃，下同)。   

2．制备洗涤缓冲液：按1：19的比例稀释洗涤浓缩液(20X)，即50mL洗涤浓缩液用蒸馏水或去离子水稀释至l升。已稀释的洗涤缓冲液在2-8℃下可稳定一个月，用前混合好。

六、巨细胞病毒试剂盒检测步骤

1．从酶标板上拆下所需数量的板条，并固定在支架上。

2．按1：40稀释待测样品、阴性对照、阳性对照和临界校正液。方法是将5µL上述样品分别加入到200µL样品稀释液中，充分混匀。

3．取100µL稀释的血清样品、临界校正液或对照品加入到相应的微孔中。并取100µL样品稀释液加入到1A位置的微孔内，作为空白对照。轻拍微孔架，去除液体中的气泡并充分混匀。37℃下温育30分钟。

4．把全部微孔中的液体清除干净后，用稀释的洗涤缓冲液冲洗5次。

5．向每个微孔中加入100µL酶联试剂，轻轻混合10秒钟，37℃温育30分钟。   

6．甩干每个微孔中的酶联试剂，然后用稀释的洗涤缓冲液冲洗5次。

7．向每个微孔中加入100µL TMB试剂，轻轻混合

10秒钟后，37℃温育15分钟。

注意：如无酶标仪，可在第七步加入TMB试剂，37℃温育15分钟后，观察颜色变化。对比患者样品的显色与临界校正液的显色深浅进行判断。

8．向上述微孔中加入100µL终止液(1NHCL)终止反应，轻轻混合30秒钟。此步对确保全部蓝色完全转变为黄色十分重要。

9．用酶标仪在450nm处于15分钟内读出每个微孔中液体的O.D.值

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