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选择凝胶成像系统的时候须注意哪些问题呢?

发布时间:2018-05-23浏览次数:1904返回列表

凝胶成像基本由CCD相机、镜头、暗室和分析软件组成,不过其功能不仅仅限于对琼脂糖凝胶进行成像,现在的成像仪趋向于多功能化,在Western Blot方面,高性能的化学发光成像系统能与胶片媲美。还适用于蛋白胶、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸、印迹膜和菌落平板等应用。那么,该如何合理选择凝胶成像系统呢?选择凝胶成像系统的时候须注意哪些问题呢?
一、TOCAN凝胶成像,如需直接切胶,先按系统中间的观察窗,打开装有进口防紫外玻璃的观察窗口,然后打开左右两侧专为割胶所设计的小门,即可进行切胶操作。
二、三个重要的可调参数分别是焦距,聚焦和光圈。其中焦距调节清晰度,聚焦调节图像大小,光圈调节明暗。一般先把光圈调节到适宜的亮度后,再调节聚焦将图像放到大,后调解焦距,在图像较大的情况下焦距比较容易调节到清晰状态,然后再把图像缩放在适宜大小后成像即可。
三、CCD的主要技术参数有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位数等。其中CCD尺寸与信噪比都是影响成像的关键因素,尺寸越大能接受的信号就越多。而热噪音越低,信噪比就越高,成像质量也就越好。采集位数指色彩灰度的表达范围。
四、分辨率与像素值的关系。一般来讲像素越多,成像也就越清晰细腻,当然这其中还要受许多因素限制。但是高像素也不一定是好的CCD,其原因就是像素大小(PixelSize),也是很重要的因素,相同数目的像素,排列越密集,像素之间就越容易出现电流干扰,容易出现"噪点"等干扰成像质量的现象出现。由于制造工艺的限制,增加尺寸,成本将会以几何级数提高。
五、动态范围决定着你能否同时在一张胶上同时看到强的信号和弱的信号,而且他们之间能保持比较好的定量关系。一般动态范围采用数量级来表示,这个数越大,表明动态范围越宽。灰阶表示一种表征光亮度的方法,12bit表示从暗到亮等分为212=4096个级别,16bit即分为216个级别,可见bit值越高能分出的细微差别越大。
六、软件功能,关注的几个特点:
1、软件的基本功能:可对不同样品,如条带,斑点,细菌克隆,芯片,细胞或者活体动物等,进行定性、定量分析,加批注,输出图像等操作。
2、图像采集方式:对于化学发光或多色荧光产品,软件应具备电影模式,可以进行图像多祯累计功能来增强线性动态范围和数据准确度。
3、曝光方式:应采用单一曝光、多重曝光,累计曝光,延时(定时)曝光多种模式可选。
4、记忆功能:软件能记忆并自动调用成像数据,这样你不用每次设置就能获得重复性好的结果。
5、软件应配备两套以上,使用单机版,多用户版或网络版,用户可彼此操作,互不干扰,互不混淆。
6、操作简便,软件应具备操作辅助工具,使软件操作简单易用。采用三步式泳道及条带分析,可以快速计算蛋白质和核酸的分子量及含量。
7、数据库功能也是必不可少的,这样可以检索、分类或比较所有生成的图像。可利用不同的显示算法程序图像化显示条带差异。
七、制冷CCD适用的情况。对CCD噪音的降低要求很高,应选用高分辨率数字冷却CCD相机结合高通透镜头系统,使其能够捕获到信号其微弱的荧光及化学发光样品图像,并且能够大程度的降低噪音,减少背景,提供出色的图像清晰度。另外可选激发光源及多位滤镜轮扩大了荧光/化学发光成像的应用范围。
八、信噪比和暗电流与CCD有的关系。通常情况下,通过降低CCD的温度来大限度的减少暗电流对成像的影响。CCD产生的暗电流随着温度下降而减少,但是在-23℃下曲线开始趋于平缓,由此可以看出温度并非需要无休止的降低的。所以在选择冷CCD时,温度在-25℃(温度,非室温以下)下一般就可以达到您的要求了。
九、像素越高不是成像清晰,产品就越好。
十、CCD和CMOS在制造上的主要区别是CCD是集成在半导体单晶材料上,而CMOS是集成在被称做金属氧化物的半导体材料上。CCD与CMOS孰优孰劣不能一概而论,但一般而言,普及型的数码相机中使用CCD芯片的成像质量要好一些。
十一、CCD的量子效率也称像素灵敏度,指在一定的曝光量下,像素势阱中所积累的电荷数与入射到像素表面上的光子数之比。不同结构的CCD其量子效率差异很大。值得注意的是CCD的量子效率与入射光的波长有关。动态范围的值越高CCD性能越好。
十二、自动变焦镜头无需手动调节,可操作性强,同时也减少了EB潜在的污染机会。再者使得将CCD内置成为了可能,从而达到防灰防尘防震的目的,好地保护了核心部件延长产品的使用寿命。
十三、紫外对人体,特别是眼睛有一定伤害,TOCAN凝胶成像系统具备紫外防护设施,在紫外灯开启的状态下,如不慎打开暗箱,紫外灯会自动熄灭防止对人体的伤害。