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北京莱普特PCR扩增仪的使用

发布时间:2017-05-15浏览次数:1744返回列表

导读:北京莱普特PCR扩增仪被广泛地运用在医学和生物学的实验室,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制,以及亲子鉴定。知晓北京莱普特PCR扩增仪的使用原理才能好的操作它。
北京莱普特PCR扩增仪的工作原理
类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
北京莱普特PCR扩增仪操作步骤
1. 在0.2mlEppendorf管内配制反应体系: 
2. 打开电源开关 
3. 选择new进入编程操作 
4. 按下列程序进行编程: (1) 94℃预变性5min;(2) 94℃变性50sec; (2) 55℃退火50sec;(4) 72℃延伸10 sec; 
5. (5)重复步骤②-④30次;(6) 72℃彻底延伸10min 
6. 从file菜单中,调取程序;
7. 按回车键确认后,按照提示输入相应的配制反应体系体系; 
8. 启动程序; 
9. 程序结束后,取出Eppendorf管。 
10. 电泳检测PCR结果。
北京莱普特PCR扩增仪保养
1.样品池的清洗先打开盖子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液体,用棉签吸干剩余液体;打开PCR仪,设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行,让残余液体挥发去除。一般5~10min即可。
2.热盖的清洗对于荧光定量PCR仪,当有荧光污染出现,而且这一污染并非来自样品池时,或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时,需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面,确保样品池的孔干净,无污物阻挡光路。
3.仪器外表面的清洗清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂,但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对PCR仪的外表面进行清洗。
4.换保险丝先将PCR仪关机,拔去插头,打开电源插口旁边的保险盒,换上备用的保险丝,观察是否恢复正常。