导读：对于PCR反应来说重要的莫过于温度控制的准确性。本文带你了解一下PCR仪温度控制的准确性有多强大。

 

          PCR是一个几何级数扩增的过程，不论是变性、退火还是延伸都需要准确控制温度，对退火而言温控显得尤为重要。有时，退火温度相差1ºC，就能带来迥然不同的结果。目前，市场上的大多数PCR仪采用Peliter元件加热，温度准确性在±0.2ºC左右。

 

　　温度控制算法的性无疑会影响温度控制的。前面提到的模块热过冲，需要非常丰富的经验，的算法才可使不同体积的样本达到稳定的设置点温度且无过冲及相关的负面效应。

 

　　对于96孔板PCR仪来说，另一个重要的参数是温度均一性，这指的是各孔之间的温度差异。均匀扩增反应板各孔的能力至关重要，在实验设计时常常被忽略。如果孔间的温度条件不一致，那么我们自然无法通过比较两个不同位置的反应孔数据，而得到可靠的结论。大多数仪器的温度均一性在±0.3到±0.5ºC之间。

 

　　对于梯度PCR而言，温度准确性的要求似乎高。通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次反应就可以筛选出适合的退火温度，优化实验，在节约成本的同时也节约了时间。

 

　　传统的梯度PCR仪的加热模块由分别控温的2个Peltier元件组成，对它们设置不同的温度，通过热传导可形成温度梯度。不过，由于均匀的金属加热模块两端设置的高温和低温之间的热学相互作用，无法实现真正的线性梯度。实际上，均匀的金属加热模块上的温度多呈S形曲线而非线性梯度，列间的温度差异不一致使其难以确定优化后的真实退火温度，尤其是在优化难以处理的试验时。

 

　　莱普特科学仪器（北京）有限公司在这方面就有独到的设计，它的加热模块有多有6个的加热/冷却模块，由温度控制器单独控制。各个Peltier模块之间用隔热材料进行物理隔离，使得相邻的Peltier模块间的温度干扰小化，温度控制加。VeriFlex技术可以在金属加热模块上模拟真正的线性温度斜率。而且梯度模式和普通模式下升降温的速率一致，确保优化的PCR反应条件在随后的日常运行中也表现出一致的结果。

 

　　研究人员的另一个噩梦是PCR反应会蒸发。这种蒸发现象使PCR反应体系中各组分浓度升高，特别是引物浓度升高，直接导致非特异性扩增。E莱普特科学仪器（北京）有限公司梯度PCR仪则采用vapo.protect技术，防止PCR反应体系的蒸发。vapo.protect 热盖利用一块软垫覆盖PCR耗材，各种不同形状的PCR耗材都能实现覆盖。这种技术提高了结果的重复性，是小体积扩增的理想之选。
 

　　Applied Biosystems则是通过热盖的自动调节和凹形设计确保PCR管的密封，基本上市场面上常见的PCR耗材都可以使用。当然，通常厂家会建议使用Applied Biosystems自己的PCR耗材，毕竟是经过厂家多重测试的，肯定也不会错。