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选择荧光定量pcr仪时应关注的四个方面

发布时间:2019-05-08浏览次数:1823返回列表

    荧光定量pcr仪的出现,大地简化了定量检测的过程,而且真正实现了定量。多种检测系统的出现,使实验的选择性强。自动化操作提高了工作效率,反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。随着生物芯片技术和荧光探针定量技术的结合,荧光定量PCR在医学检测及其他各个领域中的应用前景将加广阔,令人欣喜。那么想要选择一款适合自己需求的荧光定量PCR仪时我们又该关注些什么呢?
    选择荧光定量pcr仪时应关注的四个方面:
     1、 灵活性
    大规模繁忙的实验室设备固然让人羡慕,但是常规实验室同样可以有精彩的选择。现在的仪器供应商拥有众多技术,有的还能提供整个分子生物学的基础研究平台,不但了解、满足您现在的需求,而且还考虑到了你可能变化的需求——升级和换模块。
    2、 硬件设计特点
    荧光定量PCR仪主要有传统的96孔板式、创新的离心式等,每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾。
    传统的96孔板的荧光定量PCR可以容纳的样本量大,而且无需特殊的耗材。有些传统的96孔板的仪器采用卤钨灯激发、CCD检测,这些光学结构在96孔板的顶部,每个样品孔距光源和检测器的光程各不相同——边缘效应,对结果产生影响。为了保证、准确的实验结果,这类仪器在实验过程中通常会使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye作为参照校正实验结果。卤钨灯的使用寿命短、换成本较高已经成为很多用户头痛的问题。在实验过程中卤钨灯作为一种热光源,产生较多热能对实验结果有一定的影响。CCD大的优点就是可以同时扫描所有样品中的荧光信号,但是灵敏度较低,而且同时检测样品间的荧光信号存在干扰。
    创新的离心式的仪器通常选用LED激发、PMT检测,离心式的设计上避免了边缘效应。LED光源是冷光源对实验没有影响,因此无需采用其他荧光染料校正仪器,而且使用寿命长无需经常换。PMT每次只能收集单个荧光信号,但是检测灵敏度高。但这类仪器运行速度非常快,但也存在样本量小、耗材昂贵、没有梯度功能、存在时间积分等缺点。
    随着荧光定量PCR技术的使用,聪明的仪器生产商纷纷在传统的96孔板仪器上大作改进。在检测上突破了使用CCD改用PMT检测荧光信号,大大提高了实验的灵敏度,但激发光源仍然沿用传统的卤钨灯并且没有梯度功能。
    3、 仪器的检测通量
    在购买定量PCR仪的时候要根据实验实的需要来选择不同通量的仪器。目前市面上的荧光定量PCR的检测通量小到16个多到384个。如果进行一般的基因表达研究或病原体检测,实在不必购买昂贵的仪器,96孔的通量足够用;需要寻找要新药靶点和疾病标记的实验室可以考虑购买384孔板的仪器。假如经费有限无法购买384孔板仪器的实验室,可以考虑购买运行速度快(带有FAST模块)的96孔板荧光定量PCR仪。有了高通量的仪器,你会发现样品的制备和小体系、多样本的PCR体系构建成为限制实验速度和结果的颈瓶。
    4、 运行速度
    在荧光定量PCR仪的众多技术参数中,升降温速度也是厂家喜欢大力宣传的指标。快的升降温,可以缩短反应进行的时间,而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间,提高PCR的特异性。为了好的完成实验,各个厂家纷纷推出能快速运行的荧光定量PCR仪。