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基因扩增仪的基因组DNA的提取及扩增技术

发布时间:2014-08-28浏览次数:1253返回列表

摘要:基因扩增仪的基因组DNA的提取及扩增技术,下面小编给详细介绍。

、基因扩增仪的基因组DNA的提取

1.实验目的
基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法。实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等,破坏或降低这些结合力就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶环的共轭双键具有吸收紫外光的性质,吸收高峰在260nm处,所以,可用紫外分光光度法测定DNA的浓度。
2.基因组DNA提取试剂盒:
在高盐的状态下,DNA纯化树脂专一性地吸附DNA;而在低盐或水溶液状态下,DNA被洗脱下来。
第二、基因扩增仪PCR扩增技术

1.实验目的
本实验以所提出的全血基因组DNA为模板,以线粒体基因上一段核苷酸为引物,扩增出924bp的扩增产物。学习并掌握PCR反应的基本原理与实验技术。实验原理 多聚酶链反应技术的原理类似于DNA的天然复制过程。
2.可简述为: 在微量离心管中加入适量缓冲液,加入微量模板DNA,四种脱氧核苷酸,和耐热Taq聚合酶及两个合成的DNA引物,并有Mg2+存在。 加热使模板DNA在高温下变性,双链解链,这是所谓变性阶段。 降低溶液温度,使合成引物在低温与模板DNA互补退火形成部分双链,这是所谓退火阶段。 溶液反应温度升至中温,在Taq酶作用下,以四种dNTP为原料,引物为复制起点,模板DNA的一条双链在解链和退火之后延伸为两条双链,这是延伸阶段。
第三、基因扩增仪如何正确维护保养

1.PCR仪基因扩增仪需要定期检测,视制冷方式而定一般半年至少一次。
2.PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的,当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1—2℃时,可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。
3.当然PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制,要求越短越好,当PCR仪的降温过程超过60s,就应该检查仪器的制冷系统,对风冷制冷的PCR仪要较彻底地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。