ELISA配对抗体教你如何找到
发布时间：2016-09-01浏览次数：801返回列表
单克隆抗体制备时很多朋友会遇到这样的问题，即我们免疫用的蛋白为原核表达蛋白而目的蛋白是真核蛋白或病毒等，因为没有标准品我们做出来的抗体没有办法用标准品来验证是否与其发生反应，终导致我们做出的是无用抗体。以下内容为我公司实验室技术总结的几种方法供大家参考，希望对大家有所帮助。
一、若要检测抗原为某一细胞因子
方法：1、 将细胞系建立后，我们就可以拿到标准品了，做配对工作就相应简单。
2、通过超表达的方法建立稳定表达的细胞系，注意要在目的蛋白上加相应的标签，以便纯化。若仅仅是找到配对抗体则不需要纯化甚至不需要建立稳定表达的细胞系瞬时转染就可实现，若要进一步作出标准曲线请纯化。
3、若该种细胞因子可有某种阳性刺激物大量刺激而来，也可不做细胞系。用阳性刺激物刺激，我们细胞刺激物的上清液来做标准品也可。
二、若要检测的抗原为某种新的病毒
方法：1、大量做出该病毒某个蛋白的单克隆抗体；
2、将你做出的大量抗体中的一个做标记作为标记抗体，其他所有抗体作为包被抗体，检测第二步中确定阳性的血清，结果与阴性血清做对比，并画出点状分布图。若阳性血清大部分的点在阴性血清之上恭喜你找到配对抗体了；若结果相差不大，请重新标记一株抗体做相同实验。
3、大量采集该病毒疑似感染动物或人血液，用PCR的方法进一步确定每份血液是否真的有该病毒存在； GPR62 G蛋白偶联受体GPR62蛋白抗体
GREB1 乳腺癌雌激素调控蛋白GREB1抗体
GDF9 生长分化因子9抗体
GAPDH 3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体
GDF15 生长分化因子15/巨嗜细胞抑制因子1抗体
GPR91 G蛋白偶联受体GPR91蛋白抗体
GLUT8 葡萄糖转运蛋白8抗体
Glycophorin C 糖蛋白C抗体
GABA Transporter 1 γ氨基丁酸运载蛋白1抗体
GATA2 GATA结合蛋白2抗体
Growth Arrest Specific Protein 7 生长休止特定蛋白7抗体
phospho-GluR1 (Ser836) 磷酸化谷氨酸受体1抗体
GPR116 G蛋白偶联受体116抗体
