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基因多态性对原发性肝癌细胞浸润的实验方法

发布时间:2018-07-24浏览次数:1336返回列表

肝癌细胞

1.1 研究对象

前瞻性收集 2017 年 1 月 -2017 年 12 月吉林大学一医院收治的原发性肝癌患者临床资料。纳入标准 : 原发性肝癌(确诊依据为病理诊断) ; 有手术适应证,可行手术治疗 ; 年龄 18 ~ 75 岁 ; 同意参与本研究,并签署知情同意书。排除标准 : 合并其他恶性肿瘤 ; 复发性肝癌 ; 肝、肾、心、脑、肺等重要脏器功能不全; 感染性疾病; 血液系统疾病; 凝血功能障碍;术前接受新辅助化疗等特殊治疗 ; 3 个月内曾使用免疫调节剂; 免疫功能不全 ; 远处转移,不宜行手术治疗的晚期肝癌患者。研究期间共纳入原发性肝癌患者109 例,根据CD44 基因 rs4756195 位点单核苷酸多态性,将患者分为 AA 组、AG 组和 GG 组,分别为 67、23 和 19 例。
1.2 观察指标
主要观察指标为肿瘤组织中 CD4+ T 细胞、CD8 +T 细胞、Treg 细胞、Th17 细胞。次要观察指标为白介素 -2 (interleukin-2, IL-2) 、 白介素 -10 (interleukin-10,IL-10) 、肿瘤生长因子 -β(tumor growth factor-β,TGF-β)和白介素 -17(interleukin-17, IL-17) 。
1.3 方法
1.3.1流式细胞术
术中留取原发性肝癌组织标本(距离肝癌边缘 >1 cm 的肝癌组织) ,使用流式细胞仪(美国 Beckman coulter 公司 Epics XL 型) 检测 CD4+ T、CD8+ T、Treg 及 Th17 细胞。
1.3.2免疫组织化学法
采用免疫组织化学法检测IL-2、IL-10、TGF-β 和 IL-17,相关单克隆抗体均购自美国 Santa Cruz 公司,抗体比例 1 ∶ 80。阳性判定标准 :根据染色强度和阳性细胞百分比计算,其中不着色、浅黄色、棕黄色、黄褐色分别为0、1、2 和 3 分, 阳性细胞数为 <10%、10% ~ <40%、40% ~ <70%、≥ 70% 分别计 0、1、2 和 3 分,两者之和为总分, 总分≥ 2 分为阳性, <2 分为阴性。

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