生化试剂在实验中的常识
发布时间:2019-03-14浏览次数:1208返回列表
一、在重蒸酚中加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
二、提细胞基因组DNA时,通常要异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
三、DNA通常保存在采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。
四、蛋白印迹中封闭液的作用:封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。
五、简单的克隆载体必需包括: 复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。
六、用酚抽提细胞DNA时的作用: 使蛋白质变性。
七、使用离心机应注意事项 先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的zui大允许转速。离心前注意严格 平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。
八、分子生物学实验室常用的灭菌方法有:高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌
九、在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有: 核酸酶降解;化学降解;物理剪切。
十、在酶切反应缓冲液中加入BSA提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
二、提细胞基因组DNA时,通常要异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
三、DNA通常保存在采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。
四、蛋白印迹中封闭液的作用:封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。
五、简单的克隆载体必需包括: 复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。
六、用酚抽提细胞DNA时的作用: 使蛋白质变性。
七、使用离心机应注意事项 先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的zui大允许转速。离心前注意严格 平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。
八、分子生物学实验室常用的灭菌方法有:高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌
九、在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有: 核酸酶降解;化学降解;物理剪切。
十、在酶切反应缓冲液中加入BSA提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。